[發明專利]黃瓜綠斑駁花葉病毒快速檢測盒

無效

• 申請號: 201310548698.6
• 申請日: 2013-11-07
• 公開（公告）號: CN103558379A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 曹冬梅;李鑫;曹際娟;李立梅
• 申請（專利權）人: 曹冬梅;李鑫;曹際娟;李立梅
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/533
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，具體涉及一種用免疫層析技術檢測植物黃瓜綠斑駁花葉病毒感染的裝置。

背景技術

黃瓜綠斑駁花葉病毒（Cucumber?green?mottle?mosaic?virus）是重要的植物檢疫性病毒之一，可導致作物產量損失達15%，對葫蘆科作物的生產造成嚴重威脅。2005年遼寧省蓋州市西瓜感染了黃瓜綠斑駁花葉病毒，損失慘重。此后在廣西、遼寧、河北、山東、廣東和北京等地陸續發現疫情，已嚴重威脅著西瓜、甜瓜、黃瓜等作物的生產，因此加強該病毒的檢測極為重要。

防止來自疫區攜帶黃瓜綠斑駁花葉病毒的種子進境和傳播是控制該病毒傳入和擴散的前提；加強疫情監測并采取有效的根除措施，是防止病害擴散流行的關鍵。目前，實驗室對該病毒的快速檢測常用ELISA和PCR等分子生物學檢測方法。ELISA試劑盒存在著檢測試劑極其昂貴的缺點，PCR方法則存在著操作繁瑣，無法實施田間大面積監測的缺點。因此，簡便易行的快速檢測方法對于黃瓜綠斑駁病毒疫情的防控具有重要意義。

免疫層析技術是上世紀90年代發展起來的一種基于抗原抗體反應的簡便快速檢測技術，該技術已經廣泛應用于臨床、食品安全檢測領域。膠體金免疫層析檢測試紙條是體外快速檢測試劑的主要品種之一。以其快速、簡便、價廉、所用樣品量少、可以直接測定未經處理的樣品、污染小、不需要貴重儀器、可以直觀判斷結果、易于基層和現場使用等優點，而得到廣泛應用。但是膠體金免疫層析試紙條的靈敏性不夠理想，這大大限制了它在檢測領域中的廣泛應用。

采用比納米金顆粒信號更為強的標記物質即可在一定程度上提高免疫層析試紙條的靈敏性。新型的熒光納米顆粒恰恰具有這樣一種優勢。熒光納米顆粒是將熒光物質（如FITC、量子點、稀土螯合物）包裹在高分子材料中，形成納米顆粒（Nanoparticles，NPs）。包裹作用一方面能使更多的發光分子連接在生物分子上起到信號放大作用，另一方面可克服外界環境對發光試劑的影響(如淬滅作用等)，增加發光試劑的穩定性。包裹著熒光分子或其它發光分子的納米顆粒比單個熒光分子有高得多的發光強度和光化學穩定性。熒光納米顆粒還具有顆粒均一，大小任意可調等優勢；尤其是在標記方面，完全摒棄了膠體金依靠被動物理吸附的標記方式，采用定向共價偶聯技術，幾乎完整保持了抗體和抗原的活性，使檢測的背景噪音大大降低。采用相同的抗原和抗體試劑，熒光納米顆粒在靈敏性上可以輕易超出膠體金1-2個數量級，是極有應用前景的生物分子標記材料。

發明內容

本發明的目的在于提供一種使用方便，靈敏度高的針對黃瓜綠斑駁花葉病毒快速檢測裝置，用于植物黃瓜綠斑駁花葉病毒感染的現場快速檢測。

本發明公開一種黃瓜綠斑駁花葉病毒快速檢測盒，包括盒蓋、盒身和試紙條，盒蓋上設置用于收納熒光納米顆粒-黃瓜綠斑駁花葉病毒抗體偶聯物的反應槽，盒身內設置試紙條收納位；所述的試紙條是黃瓜綠斑駁花葉病毒快速檢測試紙條，由底板和附著在底板上依次緊密相接的樣品墊、層析膜和吸水墊組成，所述的層析膜上設有檢測區和質控區，檢測區固定與黃瓜綠斑駁花葉病毒發生特異性反應的單克隆抗體或多克隆抗體。所述黃瓜綠斑駁花葉病毒快速檢測盒的形式更有有益于產品的保存和使用，檢測時熒光納米顆粒-黃瓜綠斑駁花葉病毒抗體偶聯物與檢測樣品充分接觸，更有助于陽性樣品的檢出，并且時間證明有非常高的靈敏度。

為適用不同情況下的黃瓜綠斑駁花葉病毒快速檢測，本發明所述的黃瓜綠斑駁花葉病毒快速檢測盒可制備為各種具體的實施方式。

為實現多次使用的目的，本發明的黃瓜綠斑駁花葉病毒快速檢測盒的具體實施方式之一是在所述的盒身內設置試劑瓶收納位，所述的試劑瓶收納位放置收納了熒光納米顆粒-黃瓜綠斑駁花葉病毒抗體偶聯物的棕色試劑瓶。試劑瓶中預先灌入可供多次使用量的熒光納米顆粒-黃瓜綠斑駁花葉病毒抗體偶聯物反應液。使用時，向反應槽中倒入一次檢測量的反應液，即可進行后續檢驗。為了避免所述熒光納米顆粒-黃瓜綠斑駁花葉病毒抗體偶聯物的失活，該實施方式下的黃瓜綠斑駁花葉病毒快速檢測盒需要于4℃度保存。