[發明專利]一種鑒別吉富羅非魚性別的實時熒光PCR方法及引物組有效
| 申請號： | 201310548365.3 | 申請日： | 2013-11-07 |
| 公開（公告）號： | CN103667449A | 公開（公告）日： | 2014-03-26 |
| 發明（設計）人： | 唐永凱;李建林;李紅霞;俞菊華;徐跑 | 申請（專利權）人： | 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京經緯專利商標代理有限公司 32200 | 代理人： | 李紀昌 |
| 地址： | 214081 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 鑒別 羅非魚 性別 實時 熒光 pcr 方法 引物 | ||
1.?一種鑒別吉富羅非魚性別的實時熒光PCR方法，包括如下步驟：
第1步、提取吉富羅非魚的RNA，反轉錄成cDNA；
第2步、以吉富羅非魚的AMH基因的正向和反向引物、以及β-actin管家基因的正向和反向引物，對反轉錄的cDNA進行實時熒光PCR擴增；
第3步、通過雙標準曲線法測定吉富羅非魚的AMH基因的相對表達量，如果魚種性腺中AMH表達量比成魚卵巢高10倍以上，魚種則為雄魚，如果小于或等于10倍，魚種則為雌魚；
其中，
AMH基因的正向引物的序列如SEQ?ID?NO.1所示，反向引物的序列如SEQ?ID?NO.2所示；
β-actin基因的正向引物的序列如SEQ?ID?NO.3所示，反向引物的序列如SEQ?ID?NO.4所示。
2.?根據權利要求1所述的鑒別吉富羅非魚性別的實時熒光PCR方法，其特征在于：所述的第2步中實時熒光PCR擴增的程序是：94℃?3min,?然后40個循環94℃?5s，62℃?20s，最后72℃?3min，4℃保存。
3.?根據權利要求1所述的鑒別吉富羅非魚性別的實時熒光PCR方法，其特征在于：所述的在第3步中，雙標準曲線法的標準曲線是以反轉錄的cDNA為模板，進行5倍系列稀釋，選取5個濃度梯度進行實時熒光PCR，以Ct值為坐標，以稀釋倍數的對數為縱坐標，獲得相對定量標準曲線。
4.?一種鑒別吉富羅非魚性別的引物組，其特征在于：所述的引物組的一對正向和反向引物的序列如SEQ?ID?NO.?1～2所示。
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