[發(fā)明專利]一種檢測甘蔗赤條病菌的熒光定量PCR試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310548336.7
• 申請日: 2013-11-07
• 公開（公告）號: CN103555844A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高三基;葛丹鳳;付衛(wèi)林;吳小斌;林藝華;孫生仁;陳如凱;傅華英
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一種檢測甘蔗赤條病菌的熒光定量PCR試劑盒，包括Taqman探針QPCR-P5和引物對QPCR-F5、QPCR-R5，其中Taqman探針QPCR-P5序列為5’-CACCATCACGAAATCAATGCAGCA-3’，探針的5’端和3’端分別采用熒光基團FAM和TAMRA進行修飾；引物對QPCR-F5和QPCR-R55序列為5’-CGGGAAACCCATAATACCAC-3’和5’-GTCGATTTCTGCTGGTGAGA-3’。

2.一種用于甘蔗赤條病菌的熒光定量PCR試劑盒，其特征在于該試劑盒由下列試劑組成：

（1）陽性標(biāo)準(zhǔn)品：采用常規(guī)PCR擴增含有16S-23S?rDNA間隔區(qū)的DNA作為標(biāo)準(zhǔn)樣品，1×10¹⁰拷貝/μL，50?μL/瓶，-20℃冷凍保存；

（2）陰性對照：采用無甘蔗赤條病菌感染的甘蔗葉片組織，提取葉片總DNA為陰性對照，100?ng/μL，50?μL/瓶，-20?℃冷凍保存?zhèn)溆茫?/p>

（3）PCR反應(yīng)液：每個反應(yīng)包括5×PCR緩沖液5.0?μL、10?mmol?dNTPs?0.5?μL、25?mmol?MgCl₂?2.0?μL，以及權(quán)利要求1所述的引物對，濃度為10?μmol/L的QPCR-F5和QPCR-R5各2.0?μL，共11.5?μL，50個反應(yīng)體系共計575?μL，-20?℃保存?zhèn)溆茫?/p>

（4）Ex?Taq酶：每個反應(yīng)體系包括5?U/μL?Ex?Taq酶0.5?μL，50個反應(yīng)體系共計25?μL，-20℃保存?zhèn)溆茫?/p>

（5）探針溶液：如權(quán)利要求1所述的Taqman探針QPCR-P5，采用5’-FAM和3’-TAMRA修飾，合成后采用無菌水稀釋，濃度為10?μmol/L，每個反應(yīng)體系0.4?μL，50個反應(yīng)體系共計20?μL，-20℃保存?zhèn)溆茫?/p>

（6）無菌水：2×10?mL/瓶。