[發明專利]一種檢測甘蔗條紋花葉病毒的熒光定量RT-PCR試劑盒

有效

• 申請號: 201310548333.3
• 申請日: 2013-11-07
• 公開（公告）號: CN103555859A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 高三基;付衛林;肖勝華;劉營航;陳復資;陳如凱;傅華英
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/94
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種檢測甘蔗條紋花葉病毒的熒光定量RT-PCR試劑盒，包括Taqman探針QPCR-P1和引物對QPCR-F1、QPCR-R1，其中Taqman探針QPCR-P1序列為5’-CACCATCACGAAATCAATGCAGCA-3’，探針的5’端和3’端分別采用熒光基團FAM和TAMRA進行修飾；引物對QPCR-F1和QPCR-R1序列為5’-CGGGAAACCCATAATACCAC-3’和5’-GTCGATTTCTGCTGGTGAGA-3’。

2.一種用于甘蔗條紋花葉病毒的熒光定量RT-PCR檢測的試劑盒，其特征在于該試劑盒由下列試劑組成：

（1）陽性標準品：采用T7?RNA聚合酶體外轉錄合成含有目的檢測基因的RNA作為標準樣品，1×10¹⁰拷貝/μL，50?μL/瓶，-20℃冷凍保存；

（2）陰性對照：采用無甘蔗條紋花葉病毒感染的甘蔗葉片組織，提取葉片總RNA為陰性對照，100?ng/μL，50?μL/瓶，-20?℃冷凍保存備用；

（3）RT-PCR反應液：每個反應包括2×RT-PCR緩沖液10?μL、10?mmol?dNTPs?0.4?μL、25?mmol?MgCl₂?1.6?μL，以及權利要求1所述的引物對，10?μmol/L的?QPCR-F1和QPCR-R1各0.4?μL，共12.8?μL，50個反應體系共計640?μL，-20?℃保存備用；

（4）反應酶混合液：每個反應體系包括AMV逆轉錄酶液?0.4?μL、Taq酶0.4?μL，含量為5?U/μL，共0.8?μL，50個反應體系共計40?μL，-20?℃保存備用；

（5）探針溶液：如權利要求1所述的Taqman探針QPCR-P1，采用5’-FAM和3’-TAMRA修飾，合成后采用無RNase水稀釋，濃度為10?μmol/L，每個反應體系0.8?μL，50個反應體系共計40?μL，-20℃保存備用；

（6）無RNase水：2×10?mL/瓶。