[發明專利]一種快速化學發光免疫分析檢測人IgG的方法

有效

• 申請號: 201310547157.1
• 申請日: 2013-11-06
• 公開（公告）號: CN103604802A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 齊瑩瑩;修福榮
• 申請（專利權）人: 福建工程學院
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/543
• 代理公司: 北京市商泰律師事務所 11255
• 代理人: 陳朝陽

技術領域

本發明涉及化學檢測技術領域，尤其涉及一種快速化學發光免疫分析檢測人IgG的方法。

背景技術

免疫分析作為一種分析技術，已經廣泛應用于藥學分析、環境毒理學分析、分子生物學、生物技術、生物化學、和臨床診斷等各領域中,一直以來成為研究的熱點。自從1959年引入放射性免疫分析后，放射性免疫分析法廣泛應用于免疫分析中。但是，放射性同位素作為標記具有一些不可避免的缺點如健康危害、廢物處理問題和短的半衰期等。隨著免疫分析技術的發展，將酶、金屬離子的螯合物以及熒光染料作為標記物引入免疫分析中。這些免疫分析方法克服了上述放射性免疫分析所帶來的缺陷，因而具有很好的發展前景，但仍存在一些如靈敏度低、穩定性不好及線性范圍窄的弊端，需要尋求一種操作簡單，靈敏度高而且價格便宜，適用性強的分析方法。

化學發光分析因具有靈敏度高、線性范圍寬、試劑便宜及儀器操作簡單等優點已廣泛應用于免疫分析中。近年來，化學發光免疫分析具有靈敏度高、特異性強等優點，備受人們的青睞。納米粒子尤其金屬納米粒子具有許多優點，首先，在納米尺寸范圍內，各種各樣具有獨特性能的納米粒子很容易合成；其次，納米粒子具有較好的生物相容性，不會影響生物活性。因此，金屬納米粒子尤其貴金屬納米粒子作為生物標記引起了研究者很大的關注。近幾年來，已有很多文獻報道將貴金屬納米粒子作為標記物用于化學發光免疫分析中。Han研究組報道了基于納米金溶解并結合AuCl₄^--HCl-NaCl-Br₂-luminol體系的化學發光金屬免疫分析法，用于抗壞血酸過氧化物酶抗體(ApxIV?Ab)的測定。Li研究組和Lu研究組相繼報道了基于納米金標記的化學發光免疫分析方法用于羊抗人IgG的測定，該方法是利用將標記在抗體上的納米金溶解得到AuCl₄^-，結合AuCl₄^--luminol-H₂O₂化學發光體系測定化學發光信號。作為一種新的測定方法，開創了納米粒子標記化學發光分析的新途徑。但是在此方法中，納米金的溶解需要在高濃度的HNO₃-HCl或HBr-Br₂中溶解12小時以上，才能保證其溶解完全。在此基礎上，Li研究組又發展了一種新的化學發光金屬免疫分析方法測定人IgG，該方法將標記的納米金用Ag⁺還原溶液處理后，Ag⁺沉淀在納米金表面，經硝酸溶出后，結合Ag⁺-Mn²⁺-K₂S₂O₈-H₃PO₄-luminol化學發光體系測定化學發光信號。該方法相比于利用納米金溶解的化學發光金屬免疫分析方法，大大提高了靈敏度，而且銀的溶解剝離要比金的溶解相對要容易些，只需要在稀硝酸中可以達到完全溶解，但是仍需要繁瑣的貴金屬粒子的溶解過程。上述這些傳統的基于納米金或納米銀的化學發光金屬免疫分析方法存在一定缺陷：一、需要納米金(銀)的溶解剝離，而且能夠使金、銀粒子的完全溶解的條件一般都比較苛刻，使用的溶劑大多有毒且具有強腐蝕性。納米金(銀)的溶解不僅繁瑣耗時，而且會增加背景信號，從而降低方法的靈敏度；二、這些分析方法大多是異相的，需要多步的標記和洗脫，從而難以克服重現性和精密度的問題。Li等人提出采用不規則納米金的增強催化作用，第一次發展了“非溶出”的化學發光免疫分析方法，然而該方法中不規則納米金的合成條件難以控制，從而限制了它的實際應用。Cui等人通過標記的納米金對luminol–AgNO₃體系的催化作用，建立了一個“非溶出”的化學發光免疫分析方法。然而，該方法需要特殊的微孔發光儀和多步的標記和洗脫過程，因而使得方法繁雜，耗時很長。

發明內容

本發明需要解決的技術問題是如何通過一步標記，采用實用、簡單、靈敏的非溶出方法實現化學發光免疫分析。

為了解決以上技術問題，本發明公開了一種快速化學發光免疫分析檢測人IgG的方法，包括以下步驟：

（1）納米金的制備和表征；

（2）羊抗人IgG標記的納米金的制備；

（3）免疫反應；

（4）將化學發光試劑注入免疫反應后的納米金溶液中，檢測發光信號。