[發明專利]一種翹嘴鲌雌核發育誘導方法

有效

• 申請號: 201310546582.9
• 申請日: 2013-11-07
• 公開（公告）號: CN103563805A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 顧志敏;賈永義
• 申請（專利權）人: 浙江省淡水水產研究所
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明涉及魚類生物技術，尤其涉及一種翹嘴鲌雌核發育誘導方法。

背景技術

翹嘴鲌（Culter?alburnus?Basilewsky）是我國重要的淡水經濟魚類之一。目前，養殖用翹嘴鲌大部分仍停留在利用天然親魚或多代選留的養殖種，不僅其養殖性狀未被挖掘，而且由于親本選擇不當、近親繁殖等原因，養殖性狀已出現生長緩慢、肉質品質下降等不同程度的種質衰退現象。人工雌核發育誘導是魚類快速固定母本性狀和進行性別控制的重要技術手段，可加快魚類尤其是世代周期較長魚類的育種進程和效率。已有研究表明，經過一次人工雌核發育誘導約相當于14世代全同胞交配選育，多數魚類經過連續兩次雌核發育就可以作為品系（種）親本用于育種生產。然而，魚類雌核發育誘導方法常因種類和選用的刺激源不同而有所差異。選擇遺傳距離較遠且雜交不育的魚類精子作為激活源，不僅可獲得大量雌核發育魚，而且子代易于鑒別，是一種良好的雌核發育誘導方法。前期，我們開展了鯉魚與翹嘴鲌的雜交試驗，結果表明，鯉魚精子能激活翹嘴鲌卵子發育，但因染色體數目不匹配等原因，孵化出膜仔魚多數畸形且出膜不久后死亡，顯示鯉魚可以作為翹嘴鲌雌核發育誘導的激活源。目前，有關翹嘴鲌雌核發育誘導仍未見報道。為此，我們選擇鯉魚精子作為激活，經紫外線滅火精子遺傳物質，冷休克抑制卵子第二極體釋放，成功建立了翹嘴鲌異源雌核誘導方法，并獲得了大量第一代雌核發育魚和多個第二代雌核發育魚家系，為后續翹嘴鲌選育及全雌育種提供了重要的技術支撐。

發明內容

本發明目的在于提供一種翹嘴鲌雌核發育誘導方法，選取鯉魚精子作為激活源，經紫外線遺傳滅活，進而冷休克處理抑制卵子第二極體釋放，不僅獲得了大批量翹嘴鲌雌核發育魚，而且還極大的簡化雌核發育魚的鑒定工作。

本發明的技術方案為：一種翹嘴鲌雌核發育誘導方法，包括如下步驟：

（1）采集鯉魚精液；

（2）對鯉魚精液進行紫外線遺傳滅活處理；

（3）采集翹嘴鲌成熟卵子，用經過紫外線遺傳滅活處理后的鯉魚精液進行干法授精；

（4）受精卵進行冷休克處理后放入孵化容器中進行孵化，正常成活的魚苗即為雌核發育魚。

受精卵于授精后1-6min內進行10-35min的冷休克處理。

受精卵在2-4℃的溫度下進行冷休克處理。

所述受精卵授精后4分鐘進行冷休克處理。

所述受精卵進行冷休克處理的最佳時間為15分鐘。

鯉魚精子在進行紫外線遺傳滅活處理時，處理到60-70%的鯉魚精子仍具有活力后停止紫外線處理，將處理后的鯉魚精子保存用于第（3）步的授精。

鯉魚精子的紫外線遺傳滅活處理方法為：

A、用Hank’s氏液按體積比1:5?稀釋鯉魚精子，將稀釋后的鯉魚精子均勻涂在4℃預冷的培養皿中；

B、用紫外線燈對培養皿上的精液進行照射，照射過程中緩慢搖動培養皿使照射均勻；

C、每隔2-4min觀察精子活力，當60-70%的鯉魚精子具有活力時停止照射。

紫外線遺傳滅活處理后的精液保存于4℃的遮光容器中。

用于采集鯉魚精液的雄鯉魚親本為2-3齡，體重0.5?kg以上的健康雄鯉魚。

用于采集翹嘴鲌卵子的翹嘴鲌雌魚親本按以下方式進行強化培育：

a、將體重1.0kg以上的翹嘴鲌進行專池培育，雌雄比2:1；

b、培育初期投喂膨化配合飼料，后期增投鮮活餌料（野生小雜魚）；

c、繁殖季節時，挑選雌雄翹嘴鲌親本，人工催產后放入催產池中，流水刺激，雌雄比1:2。

有益效果：

1.?本發明具有較強的可操作性。本發明采用普通鯉魚的紫外線遺傳滅活精子刺激翹嘴鲌卵子，通過冷休克抑制卵子第二極體釋放促使染色體加倍的方法，成功獲得翹嘴鲌雌核發育個體。雌核發育二倍體仔魚的孵化率和成活率較高。

本發明獲得雌核發育魚苗易于鑒別。正常存活個體即為雌核發育魚，不需要再進行后續的染色體、遺傳標記等鑒定分析，顯著簡化了鑒定程序。

附圖說明

圖1是采用本發明獲得的翹嘴鲌雌核發育魚的初孵仔魚實體圖；

圖2是采用本發明獲得的翹嘴鲌雌核發育魚的1冬齡魚種實體圖；

圖3是采用本發明獲得的翹嘴鲌雌核發育魚的染色體圖

圖4是引物HLJHB01在雌核發育群體中的擴增圖譜；?

圖5是引物S129在3個群體中的擴增圖譜；?