[發明專利]從血液中分離循環腫瘤細胞的方法

有效

• 申請號: 201310546026.1
• 申請日: 2013-11-06
• 公開（公告）號: CN103642755A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 施奇惠;鄧宇亮;張瑜;孫帥
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 楊元焱

1.一種從血液中分離循環腫瘤細胞的方法，其特征在于，包括如下步驟：

A、將經抗凝處理的血液樣品與能夠特異性結合循環腫瘤細胞表面獨特抗原的抗體-標記單鏈多核苷酸復合物混合并孵育；

B、將孵育后的血液樣品流經微流控芯片，芯片的微通道內至少有一個表面負載有單鏈多核苷酸，該單鏈多核苷酸能夠與抗體-標記單鏈多核苷酸復合物中的標記單鏈多核苷酸特異性結合，并通過這種特異性結合將循環腫瘤細胞從血液中分離出來并固定在芯片表面以實現循環腫瘤細胞與血液樣品的分離。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的血液樣品是指經過抗凝處理的全血樣本，其體積為1毫升至10毫升，抗凝劑包括乙二胺四乙酸、檸檬酸或肝素。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗體-標記單鏈多核苷酸復合物中的標記單鏈多核苷酸與負載于芯片微通道表面的單鏈多核苷酸能夠特異性結合并形成穩定的雙鏈結構，兩種單鏈多核苷酸中至少有連續的10個核苷酸互補，或者至少有連續的20個核苷酸互補。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗體-標記單鏈多核苷酸復合物中的標記單鏈多核苷酸通過共價鍵與抗體直接相連，或者抗體與標記單鏈多核苷酸通過共價鍵或其他作用力共同連接在納米粒子上。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述能夠特異性結合循環腫瘤細胞表面獨特抗原的抗體-標記單鏈多核苷酸復合物可以是一種，也可以是針對不同抗原的多種不同的抗體-標記單鏈多核苷酸復合物。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述芯片微通道內負載多核苷酸的表面為二氧化硅、硅或通過沉積金屬氧化物納米線、納米帶而產生的粗糙化的表面。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述芯片微通道表面通過靜電作用或共價作用負載多核苷酸。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述微流控芯通過并聯組合使用或通過串聯組合使用。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述微流控芯片具有使流經該芯片的細胞增加與負載有單鏈多核苷酸表面接觸幾率的幾何結構，該幾何結構包括周期性的微柱陣列結構、具有周期性表面凹凸的“魚骨型”結構或表面沉積有納米線、納米帶的基底。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的血液樣品流經微流控芯片的流速為每小時100微升至10毫升。