[發明專利]一種新型重組蛋白及其制備和應用

無效

• 申請號: 201310545262.1
• 申請日: 2013-11-07
• 公開（公告）號: CN103554270A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 李泰明;張若洋;韓萌萌;李蘋蘋;王岐信;焦琳方;王全逸;劉俊;伍欣曄
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/21;A61K47/48;C12R1/19
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1.一種新型重組蛋白AnsB-TTP-CETPC-6×(IA2-P2)，其特征在于它包含SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列。

2.根據權利要求1所述的新型重組蛋白，其特征在于它包含SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列。

3.一種載體，其特征在于：它含權利要求2所述的核苷酸序列及權利要求1所述的重組方法：通過基因操作，將1型糖尿病特異的一段抗原表位IA2-P2串聯6段，在C端加His標簽，再在N端加源于破傷風毒素的T輔助表位肽段以及源于膽固醇脂轉移蛋白的B細胞表位肽段并融合到門冬酰胺酶的C端，其形成的融合基因置于pET-28a載體T₇啟動子的下游。這個重組的融合表達質粒稱pET-28a-AnsB-TTP-CETPC-6×(IA2-P2)-His，表達產物具有門冬酰胺酶活性。

4.一種基因工程菌，其特征在于含有權利要求3所述的載體。

5.一種新型重組蛋白AnsB-TTP-CETPC-6×(IA2-P2)的制備方法，其特征在于該方法包含步驟：

(I)在適合的表達條件下，培養權利要求4所述的宿主菌。

(II)通過溶菌、鎳柱親和層析方法，分離出AnsB-TTP-CETPC-6×(IA2-P2)重組蛋白，形成權利要求1所示的AnsB-TTP-CETPC-6×(IA2-P2)的氨基酸序列。

6.根據權利要求1所述的新型重組蛋白AnsB-TTP-CETPC-6×(IA2-P2)的門冬酰胺酶活性，且具有顯著的降低STZ誘導的1型糖尿病模型雄性C57BL／6J小鼠空腹血糖的活性，有望用于治療1型糖尿病。

7.根據權利要求1所述得到的新型重組蛋白，其特征在于可與藥物活性成分組合制成藥物組合物。

8.根據權利要求7所述所述的藥物活性成分物質為胰島素、雙胍類、磺脲類；其中雙胍類包括苯乙雙胍、丁二胍、二甲雙胍；磺脲類藥物包括列苯脲、米克胰、格列齊特、克糖利、格列波脲、格列喹酮、糖適平、美吡達、糖腎平。