[發(fā)明專利]多肽及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310544840.X
• 申請(qǐng)日: 2013-11-06
• 公開（公告）號(hào): CN103554227A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏世輝;陳霆雋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍總醫(yī)院
• 主分類號(hào): C07K7/08
• 分類號(hào): C07K7/08;C07K16/18;G01N33/68;A61K39/395;A61P27/06
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥與生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言涉及多肽及其用途，更具體地，本發(fā)明涉及分離的多肽及其在制備AQP4多克隆抗體中的用途，制備AQP4多克隆抗體的方法，AQP4多克隆抗體，用于檢測(cè)AQP4的試劑盒和用于治療AQP4相關(guān)疾病的藥物。

背景技術(shù)

AQP(aquaporins)家族是近幾年來逐漸被發(fā)現(xiàn)并認(rèn)識(shí)的一類與水通透有關(guān)的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，廣泛分布于機(jī)體多處涉及水分子快速跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的部位，在維持體內(nèi)水、電解質(zhì)運(yùn)輸平衡中發(fā)揮著重要作用。在哺乳動(dòng)物組織中已發(fā)現(xiàn)13種水通道蛋白(AQP0-AQPl2)。

AQP4是1994年被克隆確認(rèn)的水通道蛋白家族中的一員，它廣泛存在于哺乳動(dòng)物體內(nèi)，主要分布于肺、腦、眼等組織內(nèi)，是腦和眼內(nèi)分布最多、最廣泛的水通道蛋白之一，兼有水運(yùn)輸平衡及滲透壓感受器的雙重功能，在腦和視網(wǎng)膜內(nèi)水、電解質(zhì)運(yùn)輸平衡以及眼內(nèi)壓恒定的調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著重要作用。

AQP4由4個(gè)獨(dú)立的具有活性的亞基單位組成的四異聚體結(jié)構(gòu)，每個(gè)亞基的分子量約30kd。AQP4分子的氨基端和羧基端均位于胞內(nèi)，整個(gè)分子前后兩部分在序列上相似，呈180度定位的正面對(duì)稱結(jié)構(gòu)。每個(gè)亞單位含有6條疏水性的跨膜α右手螺旋結(jié)構(gòu)，每個(gè)亞基單位都有獨(dú)立的轉(zhuǎn)運(yùn)水的孔道。各亞單位間有5個(gè)不同長度的連接環(huán)(A、B、C、D和E環(huán))，A、C、E環(huán)為胞外環(huán)，B、D環(huán)為胞內(nèi)環(huán)。A、C、D環(huán)為3個(gè)不同長度的連接環(huán)；B、E環(huán)為2個(gè)功能性的長環(huán)，分別含3個(gè)主要為天冬-脯-丙氨酸(NPA)的氨基酸，這2個(gè)NPA環(huán)從雙分子層相對(duì)的面折疊入膜中，在雙分子層中線處交叉重疊就形成了狹窄的開放水孔道，且周圍被6條跨膜的螺旋所包繞，分子重組體的研究已經(jīng)預(yù)測(cè)其每個(gè)單位的孔道呈“沙漏”模型。研究證實(shí)，大多數(shù)AQP膜上存在一種對(duì)汞制劑敏感的水通道蛋白，即在第189位氨基酸殘基是半胱氨酸，可與汞結(jié)合從而堵塞水通道，AQP4在該位置無半胱氨酸，故對(duì)汞制劑不敏感，因此AQP4又稱為汞不敏感性水通道蛋白。

由于AQP4與青光眼的發(fā)病機(jī)制有密切關(guān)系，此外，它還與一些神經(jīng)疾病相關(guān)，因此，AQP4在某些疾病中的檢測(cè)有重要意義。由于抗體對(duì)于蛋白質(zhì)的基礎(chǔ)研究及其檢測(cè)方法都是必須的，因此開發(fā)AQP4的抗體意義重大。目前，單克隆抗體的親和力較差且得到一個(gè)親和力較高的單克隆抗體（親和力常數(shù)大于10⁸）比較難，而制備多抗比較容易，且多抗親合力較高，但是現(xiàn)有的AQP4多克隆抗體特異性較差且假陽率高。

因而，目前選取合適的AQP4蛋白的肽段并制備特異性好、親合力高的AQP4多克隆抗體，意義重大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出一種能夠有效用于制備AQP4多克隆抗體的多肽，另一個(gè)目的在于提出一種特異性好、親合力高的AQP4多克隆抗體。

首先，需要說明的是，本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列發(fā)現(xiàn)而完成的：