[發(fā)明專(zhuān)利]一種生產(chǎn)富含苯乳酸凝結(jié)芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵飼料及其制備

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310544807.7
• 申請(qǐng)日: 2013-11-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103636923A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王海寬;路福平;張會(huì)圖;高雪芹
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A23K1/14
• 分類(lèi)號(hào): A23K1/14
• 代理公司: 北京鼎佳達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11348
• 代理人: 王偉鋒

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制劑領(lǐng)域，是一種利用固態(tài)發(fā)酵凝結(jié)芽孢桿菌提高苯乳酸的產(chǎn)量，從而獲取富含苯乳酸的固態(tài)發(fā)酵飼料，獲取具有更高應(yīng)用價(jià)值的固態(tài)制劑的制備方法。?

背景技術(shù)

微生態(tài)制劑又稱(chēng)活菌制劑或生菌劑，主要是用于調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體微生態(tài)平衡,具有直接通過(guò)增強(qiáng)動(dòng)物對(duì)腸內(nèi)有害微生物的抑制作用或通過(guò)增強(qiáng)非特異性免疫功能來(lái)預(yù)防疾病，從而促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)或提高飼料轉(zhuǎn)化率的一類(lèi)藥物或飼料添加劑。微生態(tài)制劑具有無(wú)毒副作用、無(wú)耐藥性、無(wú)殘留、成本低、效果顯著、不污染環(huán)境等特點(diǎn)，可以促進(jìn)動(dòng)物胃腸道正常微生物區(qū)系的建立，阻礙有害物質(zhì)及廢物的吸收，改善畜產(chǎn)品的質(zhì)量等，克服了抗生素所產(chǎn)生的菌群失調(diào)、二重感染和耐藥性等缺點(diǎn)，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。?

凝結(jié)芽孢桿菌是被美國(guó)，歐盟，日本批準(zhǔn)做為飼料添加劑使用的微生物。它具有調(diào)節(jié)腸道功能紊亂，增加動(dòng)物消化功能，維持腸道內(nèi)菌群平衡和提高機(jī)體健康水平以及生產(chǎn)性能，提高動(dòng)物免疫力等功能。另外，芽孢的產(chǎn)生還使凝結(jié)芽孢桿菌具有耐酸堿，耐高溫抗逆性強(qiáng)這些優(yōu)點(diǎn)，從而凝結(jié)芽孢桿菌能很好的適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境，容易培養(yǎng)。?

凝結(jié)芽孢桿菌主要以兩種方式來(lái)影響機(jī)體的消化作用：一是促進(jìn)產(chǎn)生多種消化酶的分泌,提高對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收；二是通過(guò)該菌種在動(dòng)物消化道內(nèi)生長(zhǎng)、繁殖和定植，直接產(chǎn)生如維生素、氨基酸、短鏈脂肪酸等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并明顯增加小腸蠕動(dòng)的速度，改善腸道消化功能，促進(jìn)對(duì)飼料中各種營(yíng)養(yǎng)成分的消化與吸收。?

苯乳酸最早發(fā)現(xiàn)存在蜂蜜里面，最近發(fā)現(xiàn)一些微生物例如大部分的乳酸菌，芽孢桿菌屬等也能產(chǎn)生苯乳酸。作為一種防腐劑，苯乳酸具有廣譜抑菌活性：能夠抑制許多細(xì)菌例如李斯特菌屬，葡萄球菌，大腸桿菌，沙門(mén)氏菌和許多真菌包括酵母,許多的霉菌（婁地青霉，桔青霉）；苯乳酸已經(jīng)用在了飼料中，它對(duì)母雞的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生一些積極的影響，最終有效提高產(chǎn)蛋量和蛋的質(zhì)量。苯乳酸添加在雞的飼料中時(shí)，能夠提高產(chǎn)量，在腸道內(nèi)產(chǎn)生抗病原體的活性，降低肉質(zhì)發(fā)黃；苯乳酸在剛斷奶的和增長(zhǎng)的豬體內(nèi)能夠提高與免疫有關(guān)的血細(xì)胞的數(shù)量，降低大腸桿菌的數(shù)量。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種固態(tài)發(fā)酵凝結(jié)芽孢桿菌提高苯乳酸產(chǎn)量，從而獲取富含苯乳酸的固態(tài)發(fā)?酵飼料的一種方法。?

本發(fā)明實(shí)現(xiàn)目的的技術(shù)方案如下：?

凝結(jié)芽孢桿菌液體種子接入固態(tài)培養(yǎng)基中進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，固態(tài)培養(yǎng)基的基本成分為豆粕，米糠，麥芽浸粉和水分組成，所述固態(tài)培養(yǎng)基中加入苯丙酮酸或者苯丙氨酸，來(lái)提高苯乳酸的產(chǎn)量；固態(tài)發(fā)酵55-65h，發(fā)酵溫度為33-38℃，發(fā)酵室內(nèi)的相對(duì)濕度控制在75-80%，發(fā)酵期間每隔12h翻勻一次。固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)后獲得固態(tài)發(fā)酵飼料。?

固態(tài)培養(yǎng)基組分為水分，豆粕，米糠，麥芽浸粉；所述固態(tài)培養(yǎng)基中各組分的的添加量如下：水分，豆粕，米糠，麥芽浸粉分別為500-700g/kg，200-250g/kg,50-100g/kg,20-50g/kg。?

固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基接種量范圍為5-15%，接種量為10%時(shí)苯乳酸產(chǎn)量最大。苯丙酮酸的添加濃度為2-3g/kg；苯丙氨酸的添加量為2.5-3.5g/kg時(shí)；?

苯丙酮酸的最適添加濃度為2.7g/kg，苯乳酸產(chǎn)量最大為815mg/kg，此時(shí)的轉(zhuǎn)化率為98.7%；?

苯丙氨酸的添加量為3g/kg時(shí)，苯乳酸產(chǎn)量為752mg/kg,此時(shí)轉(zhuǎn)化率為94.9%。?

優(yōu)選的固態(tài)培養(yǎng)基組分和添加量如下：水分的添加量為600g/kg。豆粕225g/kg，米糠75g/kg時(shí)，麥芽浸粉30g/kg。?

本發(fā)明所述凝結(jié)芽孢桿菌的名稱(chēng)為T(mén)Q33，分類(lèi)名稱(chēng)Bacillus?coagulans，保藏編號(hào)為：CGMCC?No.5233保藏地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。?

所述凝結(jié)芽孢桿菌的種子液培養(yǎng)基的組成（g/L）：蛋白胨20.0、酵母膏10.0、葡萄糖20.0，初始pH7.2-7.4。?

種子液的培養(yǎng)條件：溫度37±1℃，轉(zhuǎn)速為200r.min^-1，培養(yǎng)時(shí)間18h。?

本發(fā)明使用生理鹽水(超純水配制)提取苯乳酸，將固態(tài)發(fā)酵樣品和超純水以1:4的比例混合，在4℃冰箱里放置4h后提取上清液，離心過(guò)膜后，利用高效液相測(cè)量苯乳酸的含量。?

本發(fā)明所用的HPLC的條件?