[發明專利]一種基于發光金納米簇檢測米托蒽醌的方法

有效

• 申請號: 201310544623.0
• 申請日: 2013-11-06
• 公開（公告）號: CN103575715A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 馮大千;劉國良;王偉
• 申請（專利權）人: 鹽城工學院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 韓朝暉

技術領域

本發明屬于米托蒽醌藥物檢測領域，具體涉及基于水溶性發光納米金簇的生物傳感熒光檢測抗癌藥物米托蒽醌新方法。

背景技術

?米托蒽醌是正在被臨床上廣泛使用的一種新型抗癌藥物，屬于蒽醌類抗癌藥物，其對多數惡性腫瘤均有顯著的臨床功效[參見：Thackery,?Ellen.?The?Gale?Encyclopedia?of?Cancer:?L-Z.?Detroit:?Thomson?Gale.?2002,?pp:?708-710.]，對該藥物的定量測定有助于臨床醫學診斷。當前，蒽醌類抗癌藥物的測定方法主要有高效液相色譜法、毛細管電泳法、HPLC-MS聯用法，而光譜分析研究很少，且僅有的熒光光譜法和分光光度法大都有缺陷例如靈敏度低、選擇性差，因此，尋找新的高靈敏、高選擇性、簡便、快速的光譜檢測新方法具有重要的研究意義。《分析化學》2012年12月8卷12期中《米托蒽醌在金電極上的電化學研究及其應用》報道了一種利用金電極檢測米托蒽醌的方法，其實驗方法為步驟一：金電極的處理,?將金電極用Al₂O₃粉拋光,在無水乙醇、丙酮和純水中分別超聲洗滌5?min,?并重復3次,然后進行電化學活化處理（即在0.?5?mol/L?H₂SO₄?中于－0.3～1.5?V電位范圍內進行循環伏安(CV)?掃描）,直到獲得穩定的循環伏安響應；步驟二循環伏安(CV)實驗??先將金電極在BR緩沖溶液中進行多次循環伏安掃描(掃描范圍為－0.5～1.6?V)直至獲得穩定的循環伏安曲線，然后加入適量米托蒽醌標準溶液,攪拌1?min，通氮除氧2?min后放入電極，等待4?min,?在－0.5～1.6?V電位范圍內以80?mV/s的掃描速率進行循環伏安掃描。每次測定完后,將電極用二次蒸餾水沖洗,并在空白底液中循環伏安掃描至電流穩定,以除去吸附在電極表面的物質,達到活化電極的目的，實驗表明，米托蒽醌的氧化峰電流與其濃度在1.0×10^-9～1.0×10^-8?mol/L、1.0×10^-8～1.0×10^-7?mol/L、1.0×10^-7～1.0×10^-6?mol/L范圍內均呈良好的線性關系，線性方程和相關系數分別為y=1.2421x?+?0.5639,?r=0.9906；?y=1.6952x?+?10.3,?r=0.9998；?y=3.7636x?+?23.575,?r=0.9994。檢出限可達5.6×10^-10?mol/L；對1.0×10^-7?mol/L的米托蒽醌平行測定10次的相對標準偏差為3.8%。

發明內容

近年來，貴金屬納米簇正在逐步成為可替代傳統熒光基團的新型的熒光探針而備受關注，這主要是由于其具有超小尺寸、高量子產量、光穩定性、無毒等特性[參見：Zheng?J.，Nicovich?P.?R.，Dickson?R.?M.?Annu.?Rev.?Phys.?Chem.,?2007,?58,?409-431.]。尤其是以生物大分子物質如蛋白質作為模板合成出的具有水溶性、良好的生物相容性、發光的金納米簇吸引了相當廣泛的關注?[參見：Wei?H.,?Wang?Z.,?Yang?L.,?Tian?S.,?Hou?C.,?Lu?Y.?Analyst，2010，135,?1406-1410.]。迄今為止，利用BSA為模板合成的熒光納米金簇測定米托蒽醌的工作尚未見報道。

本發明的目的是提供一種基于水溶性發光納米金簇的生物傳感熒光檢測抗癌藥物米托蒽醌新方法，以解決現有檢測米托蒽醌技術中的不足。本發明的技術方案如下：一種基于發光金納米簇檢測米托蒽醌的方法，包括以下步驟：步驟一，制備金納米簇，在469nm波長光的激發下，測定金納米簇在619nm波長處的熒光強度，記為F₀；步驟二，在步驟一中加入不同質量米托蒽醌后，測定含有不同濃度米托蒽醌的金納米簇在469nm波長光激發下，在619?nm波長處的熒光強度，記為F，根據加入不同質量米托蒽醌后，熒光強度的變化值，計算出加入米托蒽醌前后金納米簇熒光強度的變化值與米托蒽醌濃度的線性關系；步驟三，將待測樣品加入金納米簇中，測試其加入前后在469nm波長光的激發下，在619nm波長處的熒光強度的變化值，根據步驟二得到的線性關系，計算出加入米托蒽醌的質量或濃度。

所述熒光強度測試時儀器的狹縫寬度設定為5?nm。