[發(fā)明專利]一種酒神菊屬型蜂膠質(zhì)量控制的方法及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310543934.5
• 申請日: 2013-11-06
• 公開（公告）號: CN103592383A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發(fā)明（設計）人: 張翠平;胡福良;黃帥;劉嘉
• 申請（專利權）人: 浙江大學;蜂乃寶本鋪（南京）保健食品有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術領域

本發(fā)明屬蜂產(chǎn)品領域，涉及一種酒神菊屬型蜂膠質(zhì)量控制的方法。

背景技術

蜂膠具有廣泛的生物學活性，主要有抑菌、抗真菌、抗原生動物、抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗癌和抗氧化活性。蜂膠已廣泛用于保健食品，飲料及藥品。

巴西地處南美亞馬遜流域，擁有世界最大的原始森林，植物種類冠于全球，被譽為世界的“植物寶庫”。巴西不同地理來源的蜂膠化學成分及藥理活性差異較大。目前研究表明，根據(jù)地理來源，化學組成及植物源可將巴西境內(nèi)的蜂膠分為13個類型，其中巴西東南部的綠蜂膠是研究最多的，已出口至中國十余年，目前巴西綠蜂膠的主要進口國為日本，其次是中國。根據(jù)巴西發(fā)展工業(yè)部和對外貿(mào)易部的統(tǒng)計，2010年，巴西出口蜂膠51,213?Kg，產(chǎn)值$4,346,604，即84.87?$/Kg；2011年，巴西出口蜂膠38,845?Kg，產(chǎn)值$4,537,727，即116.81?$/Kg；2012年，巴西出口蜂膠41,721?Kg，產(chǎn)值$5,401,643，即129.47?$/Kg。從這些數(shù)據(jù)可以看出，與2010年相比，盡管蜂膠年出口量有所降低，但蜂膠的總產(chǎn)值及單產(chǎn)值均明顯增加，其中2012年的總產(chǎn)值比2010年增加了50%以上。日本和中國進口的巴西蜂膠主要是酒神菊屬型蜂膠，其價格也是逐增加，巴西酒神菊屬型蜂膠的原料價格已達中國楊樹型蜂膠原料價的十倍之多，而巴西蜂膠種類較多，如何保證巴西酒神菊屬型蜂膠的真實性顯得尤其重要。

巴西酒神菊屬型蜂膠的植物來源是Baccharisdracunculifolia?DC.，其主要成分為異戊烯苯丙類和p-香豆酸的異戊烯基衍生物，然而其總黃酮含量較低。由于缺少質(zhì)量控制相關的指標，巴西蜂膠銷售企業(yè)只能參照中國蜂膠的國家標準制定相應的企業(yè)標準。而中國蜂膠主要是楊屬型蜂膠，其活性成分主要是類黃酮類化合物，以總黃酮含量高為特色。因此，參照中國的蜂膠國家標準難以體現(xiàn)巴西酒神菊屬型蜂膠的生物活性，甚至出現(xiàn)以楊屬型蜂膠乃至楊樹膠冒充巴西酒神菊屬型蜂膠的不法現(xiàn)象。建立巴西酒神菊屬型蜂膠的真實性評價方法，將有利于進口和銷售巴西酒神菊屬型蜂膠的企業(yè)利益及消費者的合法權益。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種酒神菊屬型蜂膠質(zhì)量控制的方法，是一種用高效液相色譜方法檢測蜂膠中綠原酸、p-香豆酸、咖啡酸、蘆丁和Artepillin?C的方法，真正解決酒神菊屬型蜂膠真實性鑒別及質(zhì)量控制中的重要的技術難題。該方法鑒別酒神菊屬型蜂膠的真實性具有準確度高，靈敏度強、相對時間短以及成本低等優(yōu)點。

本發(fā)明的目的是通過以下方案實現(xiàn)：

（1）分別稱取綠原酸、p-香豆酸、咖啡酸、蘆丁和阿替匹林（Artepillin）C對照品10、10、10、40、10?mg，用甲醇定容為10?mL，然后分別取0.5、0.2、0.5、0.25、4?mL用甲醇定容為10?mL作為標準混合液，經(jīng)微孔膜過濾后，用高效液相色譜（HPLC）分析；

（2）取一定量的待測樣品進行冷凍粉碎混勻，取0.25g，用體積比85%的乙醇超聲提取，料液比1∶15-45，超聲15-45?min，提取2-4次，用相同濃度乙醇定容，經(jīng)微孔膜過濾后，用高效液相色譜測定方法進行測定；

（3）將待測樣品色譜圖（步驟2）與綠原酸、p-香豆酸、咖啡酸、蘆丁和Artepillin?C混合標準品色譜圖（步驟1）對比，在待測樣品中檢測到綠原酸、p-香豆酸、咖啡酸、Artepillin?C的特征峰，則為酒神菊屬型蜂膠；在待測樣品中檢測到綠原酸、p-香豆酸、咖啡酸、Artepillin?C和蘆丁色譜峰，則為添加了蘆丁的酒神菊屬型蜂膠樣品；在待測樣品中檢測不到綠原酸和Artepillin?C色譜峰，則為非酒神菊屬型蜂膠。

本發(fā)明所述的高效液相色譜儀（HPLC）的分析條件為：Sepax?C18?(150?mm×4.6?mm,?5μm)；流速1?mL/min；檢測波長280-360?nm；柱溫28-35℃；進樣量：2μL。

本發(fā)明所述的流動相為：純甲醇和體積比為1%的乙酸水混合液按體積比二元梯度洗脫，洗脫程序為：0-10?min，甲醇15-25%；10-25?min，甲醇25-40%；25-55?min，甲醇40-60%；55-75?min，甲醇60-80%；75-90?min，甲醇80%。

本發(fā)明的另一個目的是提供所述方法在酒神菊屬型蜂膠質(zhì)量控制中的應用。