[發明專利]一種下調微小RNA-126表達的方法無效
| 申請號： | 201310543832.3 | 申請日： | 2013-11-06 |
| 公開（公告）號： | CN104031980A | 公開（公告）日： | 2014-09-10 |
| 發明（設計）人： | 徐林;胡燕;周涯;李永菊;廖珍媛 | 申請（專利權）人： | 遵義醫學院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 貴陽中新專利商標事務所 52100 | 代理人： | 劉楠 |
| 地址： | 563000 *** | 國省代碼： | 貴州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 下調 微小 rna 126 表達 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種下調微小RNA-126表達的方法，其特征在于：在含CMV啟動子的真核載體上構建靶向miR-126的真核表達載體pEGFP-C2-miR-126-sponge，以下調miR-126在真核細胞中的表達；且將該載體體外轉染真核細胞后，利用熒光定量PCR儀檢測miR-126成熟體的表達，通過體外實驗觀察下調miR-126表達后的生物學效應。
2.根據權利要求1所述的下調微小RNA-126表達的方法，其特征在于：所述的pEGFP-C2-miR-126-sponge的構建，具體是，利用軟件完成miR-126-sponge的序列設計；再用HindⅢ/KpnI?雙酶切骨架載體pEGFP-C2、目的片段miR-126-sponge，回收片段純化，在16℃條件下過夜連接；連接后轉化，挑取6個菌落，接種到含10μg/ml卡那霉素的LB培養基中，12小時后提取菌液和質粒小抽法抽提質粒，并通過引物實現目的片段的PCR擴增，擴增目的片的引物序列為：上游，5’-ACGTAAACGGCCACAAGTTC-3’；下游，5’-GATCTTGAAGTTCACCTTGATGC-3’；?重組質粒經HindⅢ和KpnI雙酶切后，成功構建重組質粒pEGFP-C2-miR-126-sponge。
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