[發明專利]CD161蛋白的用途

無效

• 申請號: 201310542931.X
• 申請日: 2013-11-05
• 公開（公告）號: CN103575910A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 陳心春;陳騎;張明霞;楊倩婷;蔡毅;周伯平
• 申請（專利權）人: 深圳市第三人民醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 深圳市中知專利商標代理有限公司 44101
• 代理人: 呂曉蕾

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，特別涉及CD161蛋白的用途。

背景技術

結核病（Tuberculosis,TB）是由結核分枝桿菌感染引起的慢性傳染性疾病，結核分枝桿菌不僅可引起肺結核（85%），而且可引起肺外多種器官的結核病。盡管目前已有有效的抗結核藥物，但結核病仍然是當前感染性疾病的頭號殺手，全球每年約200萬人死于結核病；全球約三分之一的人口感染結核分枝桿菌，在這些被稱為結核菌潛伏感染（LTBI）的人群中，有約10%最終將進展為活動性結核病。

由于目前缺乏有效的結核病疫苗，結核病的預防控制主要依賴于早期發現、治療或隔離活動性結核病人。然而，現今診斷活動性結核病的檢測技術不能滿足臨床和結核病預防控制的要求，存在以下嚴重不足，1）痰結核分枝桿菌微生物檢查特異性高，是當前診斷活動性肺結核的金標準，但存在敏感性低（不足40%），耗時長（結核菌培養耗時1－2個月），實驗室生物安全要求高的缺點。2）結核分枝桿菌基因檢測，雖然實現了快速診斷的目的（1天），但直接從痰標本進行的基因檢測在敏感性方面沒有顯著提高，且存在假陰性或假陽性的問題。3）免疫學檢測中抗體檢測被世界衛生組織認定不適合結核病的診斷；細胞免疫學檢測包括結核菌素皮試（TST）和結核菌干擾素釋放試驗（IGRA），不能有效區分活動性結核患者和結核菌潛伏感染者，雖然后者在活動性結核患者檢測的敏感性顯著高于其他檢測。

CD161(NKR-P1A)屬于C型凝集素超家族，表達在天然的NK細胞和T細胞上。CD161表達在記憶性/功能性CD4+T細胞、CD8+T細胞、TCRγt?T細胞、部分CD3+胸腺細胞和Th17CD4+T細胞。雖然目前CD161的功能并沒有明確，但是最近的研究表明CD161表達在Treg細胞上，CD161+Treg細胞表達IFNγ、IL-17、IL-2等多種細胞因子，并且在炎癥部位高表達。

目前尚沒有關于CD161蛋白作為結核診斷標志物的報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種CD161蛋白的用途，通過使用與CD161蛋白特異性結合的抗體以及用于界定CD161表達細胞的抗體CD45/CD3/CD4，制備試劑盒檢測CD3+細胞、CD3+CD4+細胞、CD3+CD8+細胞上CD161表達的百分率，以區分結核潛伏感染和活動性結核。

為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現:

本發明提供了一種與CD161蛋白特異性結合的抗體以及用于界定CD161表達細胞的抗體CD45/CD3/CD4的用途，即用于制備區分結核潛伏感染和活動性結核的試劑盒。

所述與CD161蛋白特異性結合的抗體為CD161-PE；所述用于界定CD161表達細胞的抗體分別對應為CD45-APC/cy7、CD3-PE.Cy7和CD4-PE.Cy5。

所述區分結核潛伏感染和活動性結核的試劑盒還包括溶血素溶液、磷酸鹽緩沖液和多聚甲醛。

所述溶血素由溶血素：ddH₂O按照體積比1:9的比例配制而成。

利用本發明的試劑盒，可以檢測CD161基因編碼蛋白的表達情況，從而診斷是否患有活動性結核病。

在本發明中，可以使用一系列本領域已知的蛋白特異抗體。例如，BD公司的CD45-APC/cy7(貨號：340943)、CD3-PE.Cy7(貨號：57851)、CD4-PE.Cy5(貨號：555348)和BECKMAN公司的CD161-PE(貨號：PNIM3450)。

經實驗證明，本發明CD3+細胞、CD3+CD4+細胞、CD3+CD8+細胞上CD161表達的百分率在結核病人血液中的表達明顯低于健康人群以及潛伏感染人群，因此可以利用與CD161蛋白特異性結合的抗體以及用于界定CD161表達細胞的抗體CD45/CD3/CD4區分活動性結核和結核潛伏感染，使結核診斷更加準確、快速。

附圖說明：

下面結合附圖和具體實施方式對本發明作進一步詳細的說明。

圖1是本發明實施例1流式細胞圖顯示在CD45+細胞中單核細胞和淋巴細胞表達，其中A，流式檢測全血中CD45+細胞；B，在圖A的基礎上檢測CD45+細胞中淋巴細胞和單核細胞。圖1A和圖1B的橫軸：CD45APC染色信號強度；縱軸：側向角散射（SSC），細胞顆粒度。