[發明專利]一種利用魚精蛋白絮凝采集微生物細胞的方法

有效

• 申請號: 201310542207.7
• 申請日: 2013-10-29
• 公開（公告）號: CN103602588A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 牟海津;劉燕妮
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N1/20;C12N1/16;C12R1/125;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種利用魚精蛋白絮凝采集微生物細胞的方法。

背景技術

目前微生物細胞的收集是制約工業微生物收集的瓶頸。高活性濃縮發酵劑的一個重要工藝環節是要在獲取高密度培養菌體后盡最大可能將單位體積或單位重量內的活菌數得到最為有效的富集濃縮，同時杜絕或減少濃縮過程對菌體的損傷。相關資料顯示，包括超濾、膜滲析、緩沖鹽法、離心等均具有高效富集和濃縮的效果，然而在實際生產中，技術手段的性價比和實用性要比任何高新技術更為實際，許多高新技術往往效果好但效率不高或效率高但存在這種或那種不足而限制了其實際應用。因此探討簡便實用的富集采集手段有重要意義。

從絮凝劑發展趨勢可以看出，絮凝劑的品種繁多，從低分子到高分子，從單一型到復合型，總的趨勢是向廉價實用、無毒高效的方向發展。無機絮凝劑價格便宜，但對人類健康和生態環境會產生不利影響；有機高分子絮凝劑雖然用量少，絮凝能力強，絮體容易分離，但這類高聚物的殘余單體具有“三致”效應(致畸、致癌、致突變)；微生物絮凝劑對環境無污染，使用方便、安全，但成本很好，僅限實驗室階段。因而使其應用范圍受到限制；魚精蛋白作為絮凝劑使用，應用前景誘人。而且魚精蛋白作為絮凝劑使用時，不要求純度很高，可以節省純化技術，降低生產成本，菌體可以保持較好活性。隨著生物技術水平的提高，可以利用遺傳工程技術，把具有高效絮凝作用的魚精蛋白基因轉入原核或真核表達系統中，大規模生產基因工程魚精蛋白，解決魚精蛋白二次污染，使用原料緊缺問題。所以，魚精蛋白有望作為絮凝劑取代部分傳統無機高分子和合成有機高分子絮凝劑。

發明內容

針對上述問題，本發明的目的是提供一種簡單易行、效果簡單，環保，快速收集功能性細胞的方法。

本發明的步驟如下：(1)細胞的絮凝：向培養到穩定期的微生物細胞中加入魚精蛋白溶液，使魚精蛋白的含量達到0.4-1mg/mL，充分混合，靜置10-40min。(2)棄去絮凝后的上清液，下層絮凝細胞置于離心機中離心即可得到厚實的細胞沉淀體。

本發明所配制的魚精蛋白絮凝劑是將一定量的魚精蛋白溶于水，調節pH為5-8，所配制的魚精蛋白濃度為10mg/mL。

魚精蛋白的提取方法：將魚精巢解凍，去除污物和結締組織，稱取100g魚精巢于組織搗碎機中，加入200mL?0.14moL/L?NaCl溶液，勻漿1min后，攪拌20min，靜置10min，4000r/min離心分離10min，傾出上清液，沉淀再重復操作一次。將沉淀物搗碎，用300mL，7.5％H₂SO₄提取2h，4000r/min離心分離10min，上清液過濾。濾液用900mL95％乙醇沉淀30min，4800r/min離心分離10min，沉淀物用丙酮洗滌兩次，干燥，得到魚精蛋白粗品。

本發明的優點：利用此方法形成的絮體不僅密實，而且沉降性好，而且能很好的保持活性，不需要太大能耗。

本發明采用的絮凝劑-魚精蛋白對環境無污染、也不會造成生態環境遭到破壞的問題。

本發明所涉及的魚精蛋白為提取的粗品，不需要經過分離純化，節省成本。

用血球計數板計數對照組和實驗組的微生物細胞數目，魚精蛋白對各種微生物細胞的絮凝沉淀效果按照表達式：微生物細胞絮凝率(%)＝(對照組微生物細胞數目一實驗組微生物細胞數目)/對照組微生物細胞數目*100

具體實施方式

下面通過具體實例來進一步詳細說明本發明。

實施例1：將鮭魚魚精蛋白溶于水中，配制魚精蛋白溶液的濃度為10mg/mL，調節魚精蛋白的pH為7.0左右。向25mL培養到穩定期的海洋紅酵母中添加魚精蛋白，使魚精蛋白濃度為0.6mg/mL，對照組添加等量蒸餾水，充分混勻后，靜置15min，上層液體用血球計數板計數，海洋紅酵母絮凝率為95.29％。魚精蛋白濃度為0.4mg/mL時，海洋紅酵母絮凝率為81.43％。

實施例2：將鮭魚魚精蛋白溶于水中，配制魚精蛋白溶液的濃度為10mg/mL，調節魚精蛋白的pH為7.0左右。向25mL培養到穩定期的乳酸菌中添加魚精蛋白，使魚精蛋白濃度為0.8mg/mL，對照組添加等量蒸餾水，充分混勻后，靜置15min，上層液體用血球計數板計數，乳酸菌絮凝率為87.39％。