[發(fā)明專利]鴨圓環(huán)病毒基因組中ＤＮＡ的提取方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310541939.4
• 申請日: 2013-11-06
• 公開（公告）號: CN103627700A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李剛
• 申請（專利權(quán)）人: 李剛
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種實(shí)驗(yàn)方法，具體來說是指鴨圓環(huán)病毒基因組中ＤＮＡ的提取方法。?

背景技術(shù)

DuCV?屬于圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬，無囊膜，單股環(huán)型?DNA?結(jié)構(gòu)，二十面體對稱。其在電鏡下的大小與其他圓環(huán)病毒類似，直徑為15到16nm。由于目前尚不能進(jìn)行分離培養(yǎng)，所以對于其病原學(xué)特征的研究相當(dāng)有限。圓環(huán)病毒的共同特征是引起宿主的免疫抑制而導(dǎo)致繼發(fā)感染或二重及多重感染，特別是雞傳染性貧血病病毒（CIAV）和豬圓環(huán)病毒?2?型（PCV2）近年來給世界養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，從而引起全世界對圓環(huán)病毒的高度關(guān)注。鳥類圓環(huán)病毒的感染以生長發(fā)育遲緩、體重減輕、羽毛凌亂等臨床癥狀為共同特征（Todd?et?al.,2000）。已有的研究表明BFDV?常常導(dǎo)致鸚鵡羽毛營養(yǎng)嚴(yán)重失調(diào)（Latimer?et?al.,1991）；鴿子感染圓環(huán)病毒導(dǎo)致法氏囊淋巴組織壞死、組織細(xì)胞增多，肝臟中膽囊充血堵塞，腹部變大（Pare?et?al.,1999;?Soike?et?al.,?1997;?Woods?et?al.,?1994?）；金絲25雀的雛鳥常常因感染圓環(huán)病毒而導(dǎo)致死亡（Todd?et?al.,2001），來自鵝的圓環(huán)病毒引起的矮小綜合征也被報(bào)道（Soike?et?al.,1999）。圓環(huán)病毒感染造成的淋巴組織損傷導(dǎo)致了機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫功能的下降，這種免疫抑制反應(yīng)增強(qiáng)了其他共感染因素的致病性。?

發(fā)明內(nèi)容

為克服上述技術(shù)問題，我們提出了以下技術(shù)方案：?

鴨圓環(huán)病毒基因組中ＤＮＡ的提取方法，首先，將事先已經(jīng)做好準(zhǔn)備的鴨圓環(huán)病毒保存于低溫冰箱中，至少２４小時(shí)；然后取出，用無菌緩沖液對其進(jìn)行稀釋，稀釋后體積為原來的至少５倍；稀釋后將其投入冰浴至少十分鐘；高速離心，室溫下；然后加入膠原蛋白酶；混合均勻、振蕩；熱浴；取其上清液，加入等體積氯仿；搖勻；加入二分之一重量的飽和苯酚以及醋酸鈉；混合均勻；高溫曲菌；與零下七十度冷藏十分鐘后取出即可。

本發(fā)明中，所述緩沖液為無菌ＰＢS，且其PH值不應(yīng)該大于8，堿性。?

本發(fā)明中，低溫冷藏后應(yīng)該倒掉上清。??

本發(fā)明的有益效果是，成功提取了鴨圓環(huán)病毒基因組中ＤＮＡ，純度很高，操作便捷，成本較低，反復(fù)性強(qiáng)，復(fù)合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

具體實(shí)施方式

鴨圓環(huán)病毒基因組中ＤＮＡ的提取方法，首先，將事先已經(jīng)做好準(zhǔn)備的鴨圓環(huán)病毒保存于低溫冰箱中，至少２４小時(shí)；然后取出，用無菌緩沖液對其進(jìn)行稀釋，稀釋后體積為原來的至少５倍；稀釋后將其投入冰浴至少十分鐘；高速離心，室溫下；然后加入膠原蛋白酶；混合均勻、振蕩；熱浴；取其上清液，加入等體積氯仿；搖勻；加入二分之一重量的飽和苯酚以及醋酸鈉；混合均勻；高溫曲菌；與零下七十度冷藏十分鐘后取出即可。所述緩沖液為無菌ＰＢS，且其PH值不應(yīng)該大于8，堿性；低溫冷藏后應(yīng)該倒掉上清。??

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。