[發明專利]一種生產谷胱甘肽的方法

有效

• 申請號: 201310538982.5
• 申請日: 2013-11-04
• 公開（公告）號: CN104611396B
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 楊晟;陶榮盛;朱傅赟;沈正權;沈青;孫梁棟;陳成
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院;中國科學院上海生命科學研究院湖州工業生物技術中心
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種生產谷胱甘肽的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)在大腸桿菌細胞中過表達谷胱甘肽雙功能酶以及乙酸激酶，獲得重組表達細胞；所述的大腸桿菌為Rosetta(DE3)，以表達質粒pTrc99a作為重組表達質粒；和

(2)破碎(1)的細胞，將細胞破碎產物10～30％V/V與L-半胱氨酸80±40mM、甘氨酸120±40mM、L-谷氨酸或其鹽120±40mM、無機鹽和ATP 1±0.5mM混合反應，生產谷胱甘肽。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，還在大腸桿菌細胞中過表達谷胱甘肽合成酶。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的谷胱甘肽雙功能酶編碼基因和乙酸激酶編碼基因和/或谷胱甘肽合成酶編碼基因gshB表達于同一大腸桿菌細胞培養系統中；或表達于不同的大腸桿菌培養系統中。

4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(1)包括：

(a)提供一種重組大腸桿菌細胞，所述重組大腸桿菌細胞中包含以下基因的重組表達盒：谷胱甘肽雙功能酶編碼基因和乙酸激酶編碼基因，以及選擇性含有谷胱甘肽合成酶編碼基因gshB；或

提供重組大腸桿菌細胞，包括：一種包含谷胱甘肽雙功能酶編碼基因的重組表達盒的大腸桿菌細胞和一種包含乙酸激酶編碼基因的重組表達盒的大腸桿菌細胞和/或一種包含谷胱甘肽合成酶編碼基因gshB的重組表達盒的大腸桿菌細胞；和

(b)培養(a)的重組大腸桿菌細胞，從而過表達谷胱甘肽雙功能酶以及乙酸激酶。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的谷胱甘肽雙功能酶是來源于嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)的谷胱甘肽雙功能酶。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的乙酸激酶是來源于舊金山乳桿菌(Lactobacillus sanfranciscensis)或大腸桿菌(Escherichia coli)的乙酸激酶。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的無機鹽包括：鎂鹽，乙酰磷酸鹽。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，反應體系中無機鹽為：七水氯化鎂：40±30mM；乙酰磷酸二鋰鹽：120±40mM。

9.一種用于生產谷胱甘肽的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括：

重組表達載體，所述的重組表達載體包括以下基因的重組表達盒：谷胱甘肽雙功能酶編碼基因和乙酸激酶編碼基因；或包括：含有所述的重組表達載體的重組的大腸桿菌細胞；所述的大腸桿菌為Rosetta(DE3)，表達載體為pTrc99a；和

L-半胱氨酸、甘氨酸、L-谷氨酸或其鹽、無機鹽和ATP；且，它們的終濃度為：L-半胱氨酸80±40mM，甘氨酸120±40mM，L-谷氨酸或其鹽120±40mM，無機鹽和ATP 1±0.5mM。

10.如權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述的重組表達載體還包括以下基因的重組表達盒：谷胱甘肽合成酶編碼基因gshB。

11.如權利要求9或10所述的試劑盒，其特征在于，所述的無機鹽包括：七水氯化鎂，乙酰磷酸二鋰鹽。