[發(fā)明專利]對小鼠黑質(zhì)部位進(jìn)行DNA甲基化的誘導(dǎo)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310537871.2
• 申請日: 2013-11-05
• 公開（公告）號: CN103614464A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 辛竹
• 申請（專利權(quán)）人: 辛竹
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生化實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域，具體涉及對小鼠黑質(zhì)部位進(jìn)行DNA甲基化的誘導(dǎo)方法。?

背景技術(shù)

在細(xì)胞凋亡一詞出現(xiàn)之前，胚胎學(xué)家已觀察到動(dòng)物發(fā)育過程中存在著細(xì)胞程序性死亡（programmed?cell?death，PCD）現(xiàn)象，近年來PCD和細(xì)胞凋亡常被作為同義詞使用，但兩者實(shí)質(zhì)上是有差異的。首先，PCD是一個(gè)功能性概念，描述在一個(gè)多細(xì)胞生物體中，某些細(xì)胞的死亡是個(gè)體發(fā)育中一個(gè)預(yù)定的，并受到嚴(yán)格控制的正常組成部分，而凋亡是一個(gè)形態(tài)學(xué)概念，至于細(xì)胞壞死不同的受到基因控制的細(xì)胞死亡形式；其次，PCD的最終結(jié)果是細(xì)胞凋亡，但細(xì)胞凋亡并非都是程序化的。如果調(diào)節(jié)細(xì)胞“自殺”的基因出了問題，該死亡的細(xì)胞沒有死亡，反而繼續(xù)分裂繁殖，便會導(dǎo)致有問題或惡性細(xì)胞不受控制地增長，比如癌癥；如果基因錯(cuò)向不該死的細(xì)胞發(fā)出“自殺令”，不讓之分裂繁殖，使不該死亡的淋巴細(xì)胞大批死亡，便破壞了人體的組織或免疫系統(tǒng)，比如艾滋病。控制“程序性細(xì)胞死亡”的基因有兩類：一類是抑制細(xì)胞死亡的；另一類是啟動(dòng)或促進(jìn)細(xì)胞死亡的。兩類基因相互作用控制細(xì)胞正常死亡。如果能發(fā)現(xiàn)所有的調(diào)控基因，分析其功能，研究出能發(fā)揮或抑制這些基因功能的藥物，那么人類就能夠敲響癌癥和艾滋病的喪鐘。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于，針對現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種技術(shù)方案：?

對小鼠黑質(zhì)部位進(jìn)行DNA甲基化的誘導(dǎo)方法，步驟如下：首先，采用MPTP通過連續(xù)腹腔給藥的方式，誘導(dǎo)小鼠，觀察其行為，檢測其TH的表達(dá)狀況；運(yùn)用MPTP誘導(dǎo)小腦中腦黑質(zhì)部分的ＤＮＡ總體甲基化水平；運(yùn)用熒光定性分析，對甲基化DNA免疫共沉淀；獲得甲基化譜；向小鼠注射碳酸鈣溶液，觀察其表達(dá)水平。

本發(fā)明中，獲得甲基化譜之前，可以運(yùn)用亞硫酸鹽類注射的方法，誘導(dǎo)小鼠。?

本發(fā)明中，熒光定性分析，主要是采用PCR對MPTP誘導(dǎo)小鼠模型。?

本發(fā)明的有益效果是：操作簡單，成本較低，為腫瘤免疫治療提供新的思路、方法和途徑，同時(shí)可以促進(jìn)免疫殺傷作用。?

具體實(shí)施方式

對小鼠黑質(zhì)部位進(jìn)行DNA甲基化的誘導(dǎo)方法，步驟如下：首先，采用MPTP通過連續(xù)腹腔給藥的方式，誘導(dǎo)小鼠，觀察其行為，檢測其TH的表達(dá)狀況；運(yùn)用MPTP誘導(dǎo)小腦中腦黑質(zhì)部分的ＤＮＡ總體甲基化水平；運(yùn)用熒光定性分析，對甲基化DNA免疫共沉淀；獲得甲基化譜；向小鼠注射碳酸鈣溶液，觀察其表達(dá)水平。獲得甲基化譜之前，可以運(yùn)用亞硫酸鹽類注射的方法，誘導(dǎo)小鼠。熒光定性分析，主要是采用PCR對MPTP誘導(dǎo)小鼠模型。?

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。?