[發(fā)明專利]一種劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310537742.3
• 申請日: 2013-11-04
• 公開（公告）號: CN103548694A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韋坤華;李林軒;韋瑩;繆劍華;李翠;農(nóng)東新;黃雪彥;王曉峰
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)藥用植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 45104
• 代理人: 黃永校

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

背景技術(shù)

劍葉龍血樹又名千年木、血竭樹、交趾龍血樹，是漸危種，屬國家二級保護植物，2003年被國際自然與自然資源保護聯(lián)合會劃歸為易受危害的物種列為紅色名單，被定為佛得角紅皮書中的瀕危物種，是目前國內(nèi)公認的國產(chǎn)龍血竭的基源植物。

血竭是一種名貴傳統(tǒng)中藥，在我國的使用歷史已有1500年以上。據(jù)《本草綱目》記載，龍血竭性溫、平，味甘、咸，無毒，入血分，歸肺、脾、腎三經(jīng)，具有活血化瘀、消腫止痛、收斂止血，軟堅散結(jié)、生肌斂瘡等顯著功效，被譽為活血圣藥。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實，血竭具有改善機體微循環(huán)、調(diào)整機體新陳代謝、改善機體免疫功能等作用。

雖然血竭在國內(nèi)的使用歷史悠久，但在1972年以前一直是依靠東南亞和非洲進口，價格十分昂貴。1973年蔡希陶先生在云南思茅地區(qū)孟連縣境內(nèi)的石灰山上發(fā)現(xiàn)了大片可以產(chǎn)生血竭的龍血樹，才暫時緩解了我國血竭的資源壓力，從而誕生了國產(chǎn)龍血竭的歷史。但是龍血樹的生長非常緩慢，一年之內(nèi)樹干增粗還不到1厘米，龍血竭又為龍血樹受傷后流出的紅色液體，產(chǎn)量非常有限。而且隨著醫(yī)藥觀念的轉(zhuǎn)變，越來越多的人群傾向于使用傳統(tǒng)中醫(yī)藥來防病治病，中藥資源的用量急劇上升，越來越多的藥用植物趨于稀缺，甚至瀕危。近年來，市場對龍血竭需求的不斷擴大，目前龍血竭價格已漲到1000-1300元/kg，致使人們對劍葉龍血樹野生資源實施了不合理的掠奪性采伐，劍葉龍血樹野生資源日趨枯竭，瀕危滅絕，已經(jīng)被國際上很多國家列為珍稀瀕危保護植物。

為了加強龍血竭基源植物保護，防止劍葉龍血樹的瀕危滅絕，實現(xiàn)資源的可持續(xù)利用，需要大力推廣劍葉龍血樹的栽培種植。在種苗繁育上，劍葉龍血樹可通過種子、扦插或分蘗繁殖，但這種常規(guī)方法的繁殖速率低，所需時間長，所得的種苗數(shù)量非常有限，生產(chǎn)上難以實現(xiàn)大面積栽培。而采用生物技術(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)，可以有效快速地提高劍葉龍血樹種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實現(xiàn)劍葉龍血樹優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，以滿足生產(chǎn)上的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，它能夠快速繁殖出大量適合移栽的優(yōu)良劍葉龍血樹種苗、滿足生產(chǎn)需要。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案達到上述目的：一種劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：

（1）外植體的選擇與消毒：取劍葉龍血樹種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15-30min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；

（2）種子萌發(fā)獲得無菌試管苗：將步驟（1）得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27℃，光照強度1500lux，光照時間為12-14小時/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；

（3）試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng)：將步驟（2）中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27℃，光照強度1500lux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含1.0-5.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-2.0mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；

（4）叢生芽壯苗培養(yǎng)：將步驟（3）中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27℃，光照強度1500lux，光照時間為12-14小時/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含1.0-3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.5-1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；

（5）健壯植株生根培養(yǎng)：將步驟（4）中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27℃，光照強度1500lux，光照時間為12-14小時/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8；