[發明專利]一種用于轉錄組測序的建鯉肌肉RNA的提取方法

無效

• 申請號: 201310535183.2
• 申請日: 2013-11-01
• 公開（公告）號: CN103642793A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 唐永凱;李紅霞;李建林;俞菊華
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌;曹翠珍

1.一種用于轉錄組測序的建鯉肌肉RNA的提取方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)?取建鯉肌肉組織10~50mg，投入裝有液氮的研缽中，邊加液氮邊研磨，將組織研磨至粉末狀；

(2)?將粉末轉移至離心管A中，向其加入400～600μl變性液，用勻漿機在冰上勻漿10~40s；

(3)?向離心管A中加550～650μl?DEPC水，振蕩混勻；然后加5～15μl?含有蛋白酶K的RNAse-Free的水，振蕩混勻；再在50～60℃下水浴8~12min，其間需要上下顛倒離心管；

(4)?室溫下12000～14000?r/min離心3～7min，轉移上清液到離心管B中；

(5)?向離心管B中加入150～250?μl氯仿，劇烈搖動15~20s，室溫靜置3~5min；4℃的溫度下用12000～14000?r/min離心8～12min，轉移上清液到離心管C中；

(6)?向離心管C中加200～300μl高鹽溶液及200～300μl異丙醇，混勻，室溫放置8~12min，所述的高鹽溶液包括有0.8mol/L檸檬酸三鈉和1.2mol/L氯化鈉，溶劑是水；

(7)?4℃溫度下用12000～14000?r/min離心10~20min，棄上清液；

(8)?沉淀用體積濃度為70～80%乙醇水溶液洗滌兩次，7000~8000?rpm/min離心2~4?min，棄去上清；

(9)?室溫干燥沉淀2~5分鐘，加15~30μl?DEPC水溶解RNA，-70~-90℃度保存。

2.根據權利要求1所述的用于轉錄組測序的建鯉肌肉RNA的提取方法，其特征在于：所述的變性液中包括有：異硫氰酸胍472.64?mg/ml、檸檬酸三鈉7.252?mg/ml、十二烷基肌氨酸鈉5?mg/ml、β-巰基乙醇20?μl/ml，溶劑是水。

3.根據權利要求1所述的用于轉錄組測序的建鯉肌肉RNA的提取方法，其特征在于：所述的DEPC水的質量濃度是0.05～0.15%。

4.根據權利要求1所述的用于轉錄組測序的建鯉肌肉RNA的提取方法，其特征在于：所述的含有蛋白酶K的RNAse-Free的水中，蛋白酶K的質量濃度是20mg/ml。