[發(fā)明專利]一種環(huán)狀的合成多肽A 及其抗菌抗病毒應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310534929.8
• 申請日: 2013-11-01
• 公開（公告）號: CN103539848A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李富花;李詩豪;郭書悅;相建海
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;A61K38/17;A61P31/04;A61P31/20
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種環(huán)狀的合成多肽A及其抗菌抗病毒應(yīng)用，具體地說是一種合成的衍生自中國明對蝦抗脂多糖因子ALFFc的脂多糖（LPS）結(jié)合結(jié)構(gòu)域的環(huán)狀多肽及其抗菌抗病毒應(yīng)用。

背景技術(shù)

對蝦的養(yǎng)殖在我國的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中占有重要地位，近些年來，對蝦養(yǎng)殖過程中的病害問題已經(jīng)嚴重阻礙了其養(yǎng)殖生產(chǎn)的健康發(fā)展，抗生素的濫用與環(huán)境的惡化使海水養(yǎng)殖動物的病害難以從根本上得到控制。

抗菌肽（蛋白）被認為是魚、蝦、貝等防御細菌、病毒等外源病原感染的重要效應(yīng)分子，在動物的先天免疫過程中發(fā)揮重要作用。目前從甲殼動物中發(fā)現(xiàn)的抗菌肽種類繁多，抗脂多糖因子（anti-lipopolysaccharide?factor，ALF）就是其中一種重要的抗菌肽。1982年，Tanaka等首次從中國鱟（Tachypleus?tridentatus）和北美鱟（Limulus?polyphemus）的血細胞中分離得到ALF，并發(fā)現(xiàn)其能抑制LPS介導(dǎo)的凝血反應(yīng)的激活。1985年，Morita等發(fā)現(xiàn)ALF還具有很強的抗革蘭氏陰性菌活性。之后，人們相繼在斑節(jié)對蝦（Penaeus?monodon）、中國明對蝦（Fenneropenaeus?chinensis）、日本囊對蝦（Marsupenaeus?japonicus）、凡納濱對蝦（Litopenaeus?vannamei）、桃紅對蝦（Farfantepenaeus?duorarum）等多種甲殼動物中發(fā)現(xiàn)ALF基因的存在，并證實ALF的重組蛋白具有廣泛的抗革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌生長的活性。另外，研究還發(fā)現(xiàn)對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）預(yù)先與重組表達的ALF蛋白一起孵育后再注射入蝦體中，能抑制注入蝦體中WSSV的復(fù)制。

與傳統(tǒng)抗生素的作用機理不同，ALF直接中和細菌細胞壁的脂多糖，溶解細菌，因此不易產(chǎn)生細菌的耐藥性。ALF對病毒的作用機理目前仍不清楚。隨著抗生素的應(yīng)用，許多病原菌對現(xiàn)有抗生素逐步產(chǎn)生耐藥性，而新型抗生素的發(fā)現(xiàn)又極其困難，因此，ALF的研究為開發(fā)新型抗菌藥物開辟了廣闊的前景。

研究發(fā)現(xiàn)，ALF氨基酸序列中的兩個保守半胱氨酸之間形成二硫鍵，并與之間的氨基酸序列共同形成一段陰離子多肽，具有與LPS結(jié)合的能力，這段保守的結(jié)構(gòu)命名為LPS結(jié)合結(jié)構(gòu)域，被認為是ALF降解革蘭氏陰性菌細胞壁脂多糖的功能域。2011年，Sachin?Sharma等研究了根據(jù)鋸緣青蟹（Scylla?serrata）ALF的LPS結(jié)合結(jié)構(gòu)域合成的具24個氨基酸殘基的多肽在抗菌免疫過程中作用，發(fā)現(xiàn)合成多肽SsALF24具有結(jié)合LPS的活性并且對大腸桿菌都具有明顯的抑制作用，其最小抑制濃度為16.16～32.32uM（Sharma?S,Yedery?RD,Patgaonkar?MS,Selvaakumar?C,Reddy?KV.Antibacterial?activity?of?a?synthetic?peptide?that?mimics?the?LPS?binding?domain?of?Indian?mud?crab,Scylla?serrata?anti-lipopolysaccharide?factor(SsALF)also?involved?in?the?modulation?of?vaginal?immune?functions?through?NF-kB?signaling.Microbial?pathogenesis2011;50:179-191.）。

中國明對蝦中的ALF已被發(fā)現(xiàn)，研究表明其在對蝦體內(nèi)響應(yīng)細菌的感染（Liu?FS,Liu?YC,Li?FH,Dong?B,Xiang?JH.Molecular?cloning?and?expression?profile?of?putative?antilipopolysaccharide?factor?in?Chinese?shrimp(Fenneropenaeus?chinensis).Marine?Biotechnology2005;7:600-608.）。基于已有的研究結(jié)果，本發(fā)明依據(jù)中國明對蝦ALFFc的推導(dǎo)氨基酸序列，利用化學(xué)合成的方法獲得了LPS結(jié)合結(jié)構(gòu)域的環(huán)形多肽A，該環(huán)狀多肽顯示出明顯的抗菌和抗病毒生物學(xué)活性，具有重要的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種來源于對蝦的環(huán)狀的合成多肽A，具有明顯的抗菌和抗病毒活性。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

利用化學(xué)合成的方法獲得了環(huán)狀的合成多肽A，具有SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列，其序列特征為：