[發明專利]一種環狀的合成多肽B及其抗菌抗病毒應用

有效

• 申請號: 201310534912.2
• 申請日: 2013-11-01
• 公開（公告）號: CN103539847A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 李富花;李詩豪;郭書悅;相建海
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;A61K38/17;A61P31/04;A61P31/20
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

技術領域

本發明涉及一種環狀的合成多肽B及其抗菌抗病毒應用，具體地說是一種合成的衍生自中國明對蝦抗脂多糖因子FcALF2的脂多糖（LPS）結合結構域的環狀多肽及其抗菌抗病毒應用。

背景技術

對蝦的養殖在我國的水產養殖業中占有重要地位，近些年來，對蝦養殖過程中的病害問題已經嚴重阻礙了其養殖生產的健康發展，抗生素的濫用與環境的惡化使海水養殖動物的病害難以從根本上得到控制。

抗菌肽（蛋白）被認為是魚、蝦、貝等防御細菌、病毒等外源病原感染的重要效應分子，在動物的先天免疫過程中發揮重要作用。目前從甲殼動物中發現的抗菌肽種類繁多，抗脂多糖因子（anti-lipopolysaccharide?factor，ALF）就是其中一種重要的抗菌肽。1982年，Tanaka等首次從中國鱟（Tachypleus?tridentatus）和北美鱟（Limulus?polyphemus）的血細胞中分離得到ALF，并發現其能抑制LPS介導的凝血反應的激活。1985年，Morita等發現ALF還具有很強的抗革蘭氏陰性菌活性。之后，人們相繼在斑節對蝦（Penaeus?monodon）、中國明對蝦（Fenneropenaeus?chinensis）、日本囊對蝦（Marsupenaeus?japonicus）、凡納濱對蝦（Litopenaeus?vannamei）、桃紅對蝦（Farfantepenaeus?duorarum）等多種甲殼動物中發現ALF基因的存在，并證實ALF的重組蛋白具有廣泛的抗革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌生長的活性。另外，研究還發現對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）預先與重組表達的ALF蛋白一起孵育后再注射入蝦體中，能抑制蝦體中WSSV的復制。

與傳統抗生素的作用機理不同，ALF直接中和細菌細胞壁的脂多糖，溶解細菌，因此不易產生細菌的耐藥性。ALF對病毒的作用機理目前仍不清楚。隨著抗生素的應用，許多病原菌對現有抗生素逐步產生耐藥性，而新型抗生素的發現又極其困難，因此，ALF的研究為開發新型抗菌藥物開辟了廣闊的前景。

研究發現，ALF氨基酸序列中的兩個保守半胱氨酸之間形成二硫鍵，并與之間的氨基酸序列共同形成一段陰離子多肽，具有與LPS結合的能力，這段保守的結構命名為LPS結合結構域，被認為是ALF降解革蘭氏陰性菌細胞壁脂多糖的功能域。2011年，Sachin?Sharma等研究了根據鋸緣青蟹（Scylla?serrata）ALF的LPS結合結構域合成的具24個氨基酸殘基的多肽在抗菌免疫過程中作用，發現合成多肽SsALF24具有結合LPS的活性并且對大腸桿菌都具有明顯的抑制作用，其最小抑制濃度為16.16～32.32uM（Sharma?S,Yedery?RD,Patgaonkar?MS,Selvaakumar?C,Reddy?KV.Antibacterial?activity?of?a?synthetic?peptide?that?mimics?the?LPS?binding?domain?of?Indian?mud?crab,Scylla?serrata?anti-lipopolysaccharide?factor(SsALF)also?involved?in?the?modulation?of?vaginal?immune?functions?through?NF-kB?signaling.Microbial?pathogenesis2011;50:179-191.）。

中國明對蝦中的FcALF2已被發現，研究表明其在對蝦體內響應病毒的感染（Li?SH,Zhang?XJ,Sun?Z,Li?FH,Xiang?JH.Transcriptome?analysis?on?Chinese?shrimp?Fenneropenaeus?chinensis?during?WSSV?acute?infection.PLoS?ONE,8(3):e58627.）。基于已有的研究結果，本發明依據中國明對蝦FcALF2的推導氨基酸序列，利用化學合成的方法獲得了其LPS結合結構域的環形多肽B，該環狀多肽具有明顯的抗菌抗病毒生物學活性，具有重要的應用前景。

發明內容

本發明旨在提供一種來源于對蝦的環狀的合成多肽B，具有明顯的抗菌和抗病毒活性。

本發明的技術方案如下：

利用化學合成的方法獲得了環狀的合成多肽B，具有SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列，其序列特征為：

SEQ?ID?No.1：Ac-Yc(CSFNVTPKFKRWQLYFRGRMWC)P-NH₂