[發明專利]一種淡水小龍蝦多巴脫羧酶基因Pc-DDC、其編碼的氨基酸序列以及克隆方法

無效

• 申請號: 201310534689.1
• 申請日: 2013-11-04
• 公開（公告）號: CN103667324A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 杜志強;任乾;李新蒼
• 申請（專利權）人: 內蒙古科技大學
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12N15/10
• 代理公司: 包頭市專利事務所 15101
• 代理人: 莊英菊

1.一種淡水小龍蝦多巴脫羧酶基因Pc-DDC，其特征在于，其核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1。

2.根據權利要求1所述的淡水小龍蝦多巴脫羧酶基因Pc-DDC，其特征在于，淡水小龍蝦多巴脫羧酶基因Pc-DDC編碼的蛋白質的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2。

3.一種淡水小龍蝦多巴脫羧酶基因Pc-DDC的克隆方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）選用淡水小龍蝦作為實驗材料，利用動物總RNA提取試劑盒提取各組織總RNA，獲得淡水小龍蝦各個組織的總RNA樣品；

（2）以步驟（1）獲得的總RNA樣品作為模板，利用一步法RT-PCR擴增試劑盒進行cDNA的反轉錄合成，獲得淡水小龍蝦各個組織的cDNA樣品；

（3）設計擴增淡水小龍蝦多巴脫羧酶基因Pc-DDC編碼區的前后引物Pc-DDC-F和Pc-DDC-R：

Pc-DDC-F：5′-tactcagaattcATGGACGCCGATCAGTTCAG-3′

Pc-DDC-R：5′-tactcactcgagTTACTCCTGCAGAATGATC-3′

以步驟（2）中的淡水小龍蝦各個組織的cDNA樣品作為模板，進行PCR擴增反應，反應的程序為：94℃預變性3min，94℃變性30s，58℃退火50s，72℃延伸50s，循環35圈，后延伸5min，獲得PCR反應產物；

（4）將步驟（3）獲得的PCR反應產物進行回收、純化，之后進行EcoRⅠ和XhoⅠ核酸內切酶雙酶切，并且與經過EcoRⅠ和XhoⅠ核酸內切酶雙酶切處理的pET-28a載體連接，轉化大腸桿菌DH5α克隆菌株感受態細胞之后，進行菌落PCR篩選，將篩選得到的陽性克隆子送測序公司進行序列測定，獲得淡水小龍蝦多巴脫羧酶基因Pc-DDC基因序列。

（5）將步驟（4）獲得的基因序列，利用分子生物學Expasy在線軟件（http://au.expasy.org）進行氨基酸序列的翻譯，獲得對應蛋白質的氨基酸序列。