[發明專利]一種微RNA表達載體及應用

無效

• 申請號: 201310533965.2
• 申請日: 2013-11-04
• 公開（公告）號: CN103695464A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 王萍玉;李有杰;謝書陽;張菡菡;龐敏;張超
• 申請（專利權）人: 濱州醫學院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及分子生物學和基因治療學領域，尤其涉及的是一種微RNA表達載體及其在抑制肺癌腫瘤細胞增殖和轉移中的應用。

背景技術

microRNAs(miRNAs)通常為21-23個核苷酸，是一類重要的小分子非編碼RNA。miRNAs表達具有重要作用，控制著細胞的生長、分化和凋亡，與腫瘤發生密切相關。miRNAs通常是由RNA聚合酶II轉錄生成，最初產物是被稱為pri-miRNA的大的前體分子。pri-miRNAs在細胞核內被Drosha(RNase?III)和雙鏈RNA結合蛋白Pasha處理成約70m組成的pre-miRNA，該分子為一個堿基不完全配對的莖環狀結構。RAN-GTP和Exportin5可將pre-miRNA分子輸送到細胞質中。隨后該莖環狀結構被Dicer(另一種RNaseIII)加工成約22個核苷酸長度的成熟miRNA雙鏈。接下來這種成熟的雙鏈miRNA會很快整合到miRISC復合體中(復合體中含有Argonaute蛋白)。成熟miRNA結合到與其序列互補的mRNA位點，通過兩種依賴于序列互補機制負性調控靶基因的表達。其抑制翻譯還是降解發揮作用是由miRNA和它的目的mRNA之間的錯配程度決定的，匹配程度高的目的mRNA將被降解。

miRNAs可以起到腫瘤抑制基因作用，miR-15a／miR-16可負調控BCL2，因此，這兩個miRNAs的缺失或下調，導致了BCL2表達的升高，能促進白血病、淋巴瘤和前列腺癌的發生。let-7c家族的表達水平在肺癌、卵巢癌、乳腺癌等多種腫瘤細胞中顯著下調，而且肺癌和乳腺癌中let-7的表達水平與患者的生存時間呈正相關。miR-99也可以作為抑癌miRNA抑制腫瘤的增殖，導致腫瘤細胞的凋亡。但有關miR-596研究報道較少，功能還需要進一步研究。miRNA作為一種轉錄后的調節因子與腫瘤的發生密切相關，克隆抑癌miRNA基因在腫瘤的基因治療方面具有重要的價值。

現有治療肺癌、胃癌和子宮頸癌等腫瘤的方法主要有藥物化療、放療及手術治療，但是上述的方法都有缺陷，尤其對于不能手術治療的患者，化療達不到滿意的治療效果。

因此，現有技術存在缺陷，需要改進。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術在治療腫瘤中存在的缺陷，提供了一種微RNA表達載體及其在抑制肺癌腫瘤細胞中的應用。

本發明的技術方案如下：

一種微RNA表達載體，其特征是，該微RNA表達載體具有ATTACGCCAGCTTGCATGCCTGCAGGTCGACGATTCGGGACTTACAGGGAACAGCACAGCCTGGGGGCCATCGCAGATGCCCTCCAGGAAAGCAGGATGCTCTGCAGATAGGACGGCTGTGGCCGCTGCCCCAGGAAACAGCCCAGGACGCTGCCTGAGCTCAGAGGGTTCCGGACACAGACCGCGCTCCCCGCTTTGCAAACCACACCCAGTCCATTTCCTAGTGTGAGTTTGTCTCTACTCATCGGTTTGTGTCTTTATAAGAGTTCTAAAGTAAAACAAAAACACACAAGGACAGTGACCTAGACAGCACCCAGGGATGGGTCGGGTCGGCCTCCGAAGGGCAGCAGCTGCCATGCGGGAGGCAGGTTCCCGAGGAGCCGGGCAGGCTTCGGAGAGGCCGTGCTCGCTTTCCCGACTGTGGCGACGGATCCACCTGCTATGCGTTCCTCAGAACTCACTGAACCGCCCACGTTAATGACGCGCAGTTCGCCGTGTGCCAATGACGCCTCAATCAAGCTGCTAAATCTCTAGAGGATCCCCGGGTACCGAGCTCGAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTAC基因片段。

所述的微RNA表達載體在抑制肺癌腫瘤細胞增殖和轉移中的應用。

本發明克隆了miR-596表達基因片段，并構建U6-miR-596表達載體，實驗證明載體能夠抑制肺癌腫瘤細胞的增殖，對肺癌腫瘤細胞的增殖具有殺傷作用，引起肺癌細胞系的凋亡，為腫瘤的基因治療提供了新的思路。

附圖說明

圖1為U6-miR-596表達載體構建示意圖；

圖2為定量PCR檢測miR-596表達。

圖3為MTT分析對細胞的生長抑制情況。