[發(fā)明專利]一種協(xié)同抑制常見微生物的天然抑箘劑組合物

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310529325.4
• 申請日: 2013-10-31
• 公開（公告）號: CN103549622A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李大鵬;劉洪霞
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A23L3/3463
• 分類號: A23L3/3463
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

（一）技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種協(xié)同抑制常見微生物的天然抑箘劑組合物，屬于食品安全保藏范疇。?

（二）背景技術(shù)

隨著人們生活水平的提高，綠色食品、健康食品的概念越來越被人們所接受，長期使用化學(xué)防腐劑會對人的身體造成傷害，人們希望使用天然食品防腐劑來取代化學(xué)防腐劑。目前，國外食品防腐劑行業(yè)已相當(dāng)成熟，開發(fā)出了數(shù)十種天然食品防腐劑。乳酸鏈球菌素又稱乳鏈菌肽（nisin）是由乳酸鏈球菌產(chǎn)生的一種小分子多肽物質(zhì)，呈白色固體粉末，在室溫和酸性條件下比較穩(wěn)定，經(jīng)美國認證為第一個安全抑菌素。目前，已經(jīng)有60多個國家和地區(qū)批準(zhǔn)乳酸鏈球菌素可作為一種純天然食品防腐劑、保鮮劑使用，被廣泛用于乳制品，肉制品，罐裝食品，酒精飲料，醬菜，巧克力等中的防腐保鮮。ε-聚賴氨酸是一種新型天然防腐劑，具有廣譜抑菌性又安全無毒的特點，已于2003年10月被FDA批準(zhǔn)為安全食品保藏劑，在日本的食品生產(chǎn)中被廣泛使用。?

單一抑菌劑的使用往往存在抑菌譜窄，使用劑量偏大的問題，具有潛在的安全隱患。通過幾種抑菌劑復(fù)配使用可以擴大抑菌譜，同時不同抑菌物質(zhì)之間產(chǎn)生的協(xié)同效應(yīng)也可在較低抑菌劑使用濃度的條件下起到更好的應(yīng)用效果。因此，篩選具有協(xié)同效應(yīng)的天然抑菌劑并在較低劑量的條件下應(yīng)用于食品保藏對于降低生產(chǎn)成本和提高食品安全性具有重要的實踐價值和現(xiàn)實意義。?

（三）發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明首先采用常規(guī)方法確定了ε-聚賴氨酸和乳酸鏈球菌素對食品常見微生物（表1）的最小抑菌濃度（MIC），然后根據(jù)ε-聚賴氨酸和乳酸鏈球菌素對不同微生物的MIC，采用棋盤實驗法得到ε-聚賴氨酸和乳酸鏈球菌素組合物：取96孔聚苯乙烯微孔板，用微量移液器在第1～8列沿X軸方向（從左到右）每列孔中依次加入2倍MIC～1/64倍MIC質(zhì)量濃度（濃度由高到低，一次1/2倍稀釋）的ε-聚賴氨酸，以同樣方法在第A～F行沿Y軸方向（從上到下）每行孔中依次加入2倍MIC～1/64倍MIC質(zhì)量濃度（濃度由高到低，一次1/2倍稀釋）的乳酸鏈球菌素（乳酸鏈球菌素對漢遜酵母、黑曲霉、擴展青霉無最小抑菌濃度，在棋盤法中最高濃度為1000μg/mL，即相當(dāng)于2倍MIC值，并按照1/2倍依次稀釋使用）。?

兩種抑菌劑加入完成后即可在微孔板上獲得不同質(zhì)量濃度比例組合的ε-聚賴氨酸和乳酸鏈球菌素組合物。然后在微孔板中加入制備好的供試菌種菌液（供試菌種見表1，每個菌種均按以上方法實驗），加液完成后加蓋上板，輕微振蕩混勻，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)后觀?察抑菌結(jié)果并得出分級抑菌濃度指數(shù)（FIC_I）。根據(jù)FIC_I值確定了ε-聚賴氨酸和乳酸鏈球菌素濃度在質(zhì)量比2:1的比例下對大腸桿菌，在質(zhì)量比1:1的比例下對金黃色葡萄球菌，在質(zhì)量比1:2的比例下對枯草芽孢桿菌，在質(zhì)量比1:8的比例下對藤黃微球菌，在質(zhì)量比1:16的比例下對擴展青霉菌具有顯著的協(xié)同抑菌效果（表1）。?

表1棋盤法中ε-聚賴氨酸，乳酸鏈球菌素對七種供試菌實驗濃度和FIC_I

FIC_I指數(shù)的計算方法：FIC_I=A藥聯(lián)用時的MIC/A藥單用時的MIC+B藥聯(lián)用時的MIC/B藥單用時的MIC，F(xiàn)IC_I≤0.5，是協(xié)同作用；0.5<FIC_I≤1，是部分協(xié)同或相加作用；1<FIC_I≤2，是無關(guān)作用；FIC_I>2時是拮抗作用。?

（四）附圖說明

圖1乳酸鏈球菌素與ε-聚賴氨酸協(xié)同抑菌流程圖?

圖中1是不同質(zhì)量濃度比例的乳酸鏈球菌素溶液2是不同質(zhì)量濃度比例的ε-聚賴氨酸溶液3是不同質(zhì)量濃度比例的乳酸鏈球菌素溶液和ε-聚賴氨酸溶液混合4是協(xié)同抑菌。?

（五）具體實施方式

實施例1：乳酸鏈球菌素與ε-聚賴氨酸協(xié)同抑制大腸桿菌?