[發明專利]反向調節煙草NtPSY基因功能的載體組合物

有效

• 申請號: 201310528496.5
• 申請日: 2013-10-30
• 公開（公告）號: CN103555748A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 雷波;丁福章;盧坤;趙會納;任竹;蔡凱;潘文杰
• 申請（專利權）人: 貴州省煙草科學研究院
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/66;C12N15/82
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種載體組合物，其中至少一個載體含有SEQ?ID?NO.1所示的NtPIF1基因編碼，至少另外一個載體含有SEQ?ID?NO.2所示的NtRAP2.2基因編碼。

2.根據權利要求1所述的載體組合物，所述的NtPIF1和NtRAP2.2的基因編碼分別為SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的序列分別經過BamHI/XhoI和BamHI/SalI雙酶切之后的片段。

3.根據權利要求1所述的載體組合物的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

利用表1中的引物NtPIF1-eF?cgGGATCCATGAATCATTCAGTTCCTGATTTTGATATGGATG/NtPIF1-eR

cgCTCGAGCAATATGCAACAACTAGACTTTTCGATGGTG和NtRAP2.2-eF??cgGGATCCATGTGCGGTGGTGCCATAATCTC/NtRAP2.2-eR

acgcGTCGACATAGACACCTCTCATTAGAGAAGAAAGTTC，擴增SEQ?ID?NO.1和SEQIDNO.2所示的NtPIF1和NtRAP2.2基因的編碼區序列，擴增產物膠回收后以BamHI/XhoI和BamHI/SalI雙酶切并再次膠回收；

帶His標簽的重組蛋白表達載體pET28a和GST標簽的pGEX-4T1載體分別以BamHI/XhoI和BamHI/SalI雙酶切，回收載體骨架；

分別將NtPIF1和NtRAP2.2表達片段連接至pET28a和pGEX-4T1載體，構建成pET-NtPIF1和pGEX-NtRAP2.2載體。

4.根據權利要求1所述的載體組合物的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

用表1中的引物NtPIF1-yF?cgGAATTCATGAATCATTCAGTTCCTGATTTTGATATGGATG/NtPIF1-yR?cgGGATCCCAATATGCAACAACTAGACTTTTCGATGGTG和NtRAP2.2-yF?cgGAATTCATGTGCGGTGGTGCCATAATCTC/NtRAP2.2-yR

cgGGATCCATAGACACCTCTCATTAGAGAAGAAAGTTC擴增出SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的NtPIF1和NtRAP2.2基因編碼區，通過EcoRI和BamHI酶切連接到pGBKT7和pGADT7雙元表達載體中，構建成激活域載體pGAD-NtPIF1和pGAD-NtRAP2.2，綁定域載體pGBK-NtPIF1和pGBK-NtRAP2.2，獲得含有pGAD-NtPIF1與pGBK-NtRAP2.2及pGAD-NtRAP2.2和pGBK-NtPIF1質粒載體組合物。

5.根據權利要求1或2所述的載體組合物載體組合物在反向調節煙草中NtPSY基因的用途。

6.根據權利要求1或2所述的載體組合物載體組合物在調節煙草類胡蘿卜素代謝合成中的應用。