[發明專利]DJ-1蛋白在制備骨肉瘤診斷和治療產品中的應用

無效

• 申請號: 201310528113.4
• 申請日: 2013-10-31
• 公開（公告）號: CN103585619A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 楊波;何俏軍;曹戟;謝楠;張俊
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K38/17
• 分類號: A61K38/17;A61K49/00;A61P35/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術領域

本發明屬生物制藥領域，涉及一種DJ-1蛋白在制備診斷和治療骨肉瘤產品中的應用。

背景技術

骨肉瘤是最常見的惡性成骨性腫瘤之一，流行病學研究發現該病好發于15-25歲的青少年，且男性發病率高于女性。骨肉瘤好發部位是長管狀骨的干骺端，該腫瘤惡性程度高，預后極差，單純截肢后患者的5年生存率低于20%。因此，有效診斷和防治骨肉瘤是目前骨腫瘤研究中的重點和難點。

人DJ-1蛋白是由DJ-1基因（Genebank?No.NM?007262.4）編碼而來，是Thij/PfPI?家族成員之一。目前該蛋白的功能尚未被完全探明，有研究報道其與人類常染色體隱性遺傳早發型帕金森病相關；在腫瘤方面有報道DJ-1在多種腫瘤性病變中異常表達，并可能參與惡性腫瘤的發生發展，但DJ-1蛋白能否作為骨肉瘤診斷的標記分子和治療靶點尚無研究報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種DJ-1蛋白在制備治療骨肉瘤的藥物中的應用，該DJ-1蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No：1所示。所述治療骨肉瘤的藥物包括：通過RNA干擾抑制DJ-1基因表達的雙鏈核糖核酸，或用于抑制DJ-1蛋白功能的短肽和小分子化合物。

本發明的另一個目的是提供一種DJ-1蛋白在制備診斷骨肉瘤產品中的應用，該DJ-1蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No：1所示。所述診斷骨肉瘤的產品包括：用RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交或基因芯片診斷骨肉瘤的產品。

其中所述用免疫檢測診斷骨肉瘤的產品包括：與DJ-1蛋白特異性結合的抗體。

所述用RT-PCR診斷骨肉瘤的產品至少包括一對特異性擴增DJ-1基因的引物：正向引物：5’-AGACGGTCATCCCTGTAGAT-3’（SEQ?ID?No：2）；反向引物：5’-GCTCCTTCAGTATCTCCTTCAC-3’（SEQ?ID?No：3）。?

所述用實時定量PCR診斷骨肉瘤的產品至少包括一對特異性擴增DJ-1基因的引物：正向引物：5’-AGCCGTGATGTGGTCATTT-3’（SEQ?ID?No：4）；反向引物：5’-?GTCTTTAGCAAGAGGGTGTGT-3’（SEQ?ID?No：5）。?

所述用原位雜交診斷骨肉瘤的產品包括：與DJ-1基因的核酸序列雜交的探針：5’-TCATCCACATTACTGGAGGTAAGTAGT-3’?（SEQ?ID?No：6）。?

所述用基因芯片診斷骨肉瘤的產品包括：與DJ-1基因的核酸序列雜交的探針：5’-ACTCGGTTGTCTCGTCATCCTGGACGT-3’（SEQ?ID?No：7）。?

在本發明中，可以使用一系列本領域已知的方法來制備針對DJ-1蛋白的特異性抗體。例如，將純化的人DJ-1蛋白或它的抗原片段注射入動物體內以產生多克隆抗體。同樣，表達人DJ-1蛋白或它的抗原片段的細胞也可以用來對動物致免疫而產生抗體。根據本發明制備的抗體也可以是單克隆抗體，這些單克隆抗體可用雜交瘤技術制備。本發明的抗體包括可以阻抑DJ-1功能的抗體，也可以是不影響人DJ-1蛋白功能的抗體。每一類抗體都可以通過對人DJ-1蛋白的片斷或功能域致免疫而產生，而人DJ-1蛋白產物及其片段可以用重組方法產生或用多肽合成儀進行合成。與非修飾形式的DJ-1蛋白結合的抗體，可以利用在原核細胞例如E.?coli中產生的基因產物來免疫動物而得到。與翻譯后修飾形式如糖基化或磷酸化DJ-1蛋白或多肽結合的抗體，可以利用在真核細胞如酵母或昆蟲細胞中產生的基因產物來免疫動物而得到。

在本發明中，所述探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其他衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要能夠完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結合，任何長度都可以。所述探針的長度可以短至25、20、15或10個堿基長度。同樣，所述探針的長度可長至60、80、100、150、300個堿基對或更長，甚至整個基因。由于不同的探針長度對雜交效率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對，最長一般不超過30個堿基對，與目的核苷酸序列互補的長度以15-25個堿基對最佳。所述探針自身互補序列最好少于4個堿基對，以免影響雜交效率。