[發(fā)明專利]一種石斛生物堿類成分的高效液相色譜指紋圖譜構(gòu)建方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310526400.1
• 申請(qǐng)日: 2013-10-29
• 公開（公告）號(hào): CN103604877A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林毅;宋程;金青;蔡永萍;鐘倫鎖;孫時(shí)偉;張玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責(zé)任公司 34101
• 代理人: 何梅生;王偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及石斛生物堿類成分高效液相色譜指紋圖譜構(gòu)建方法，屬于生物制品和中藥制備技術(shù)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

生物堿是石斛中重要的藥用成分之一，也是石斛屬植物中最早分離并進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)的化合物。一般認(rèn)為，石斛生物堿的藥理作用主要表現(xiàn)在抗腫瘤、對(duì)心血管、胃腸道抑制作用及止痛退熱強(qiáng)神等作用。研究表明金釵石斛主要成分石斛堿具止痛解熱作用，可降低心率、血壓，減緩呼吸，可產(chǎn)生中度的高血糖，具強(qiáng)壯作用并可解巴比妥中毒。然而，不同石斛品種生物堿成分的組成和含量差異較大，王憲楷等對(duì)之前生物堿方面的研究進(jìn)行了總結(jié)，發(fā)現(xiàn)有5種石斛屬植物(D.nobile，D.kildebrandii，D.friedricksianum，D.findlayanum，D.wardianum）中含石斛堿類生物堿，8種石斛屬植物含其他類型且彼此無(wú)共同基核的生物堿，且石斛堿僅在(D.nobile，D.findlayanum)中發(fā)現(xiàn)。鑒于石斛生物堿成分研究的復(fù)雜性，急需開發(fā)一種快速高效的指紋圖譜方法，用于不同石斛的鑒別和石斛藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)。目前，國(guó)內(nèi)外發(fā)表的文獻(xiàn)中，僅采用顯微鑒定，薄層色譜和高效液相色譜與氣相色譜法及質(zhì)譜對(duì)某種石斛中的某些特征成分進(jìn)行研究，較缺少不同石斛生物堿類整體系統(tǒng)地研究和比較，顯然，這種質(zhì)量評(píng)價(jià)方法不能準(zhǔn)確鑒別和評(píng)價(jià)石斛生物堿成分的質(zhì)量。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種石斛生物堿類成分高效液相色譜指紋圖譜的構(gòu)建方法。本發(fā)明采用HPLC技術(shù)對(duì)不同石斛進(jìn)行測(cè)定，建立生物堿的指紋圖譜，為以后石斛生物堿類成分的科學(xué)研究提供一個(gè)快速分析和檢測(cè)的方法和手段。?

本發(fā)明解決技術(shù)問(wèn)題采用如下技術(shù)方案：?

一種石斛生物堿類成分的高效液相色譜指紋圖譜構(gòu)建方法，其特點(diǎn)在于，所述方法包括：?

（1）材料收集?

收集不同產(chǎn)地的不同品種石斛鮮苗?

（2）標(biāo)準(zhǔn)石斛樣品溶液的制備：取步驟1）的各石斛鮮苗在105℃的烘箱中殺青15～20min，60℃烘箱中恒溫烘干，粉碎，過(guò)60目篩，得樣品粗粉，取樣品粗粉0.5g，加入5ml氨水，潤(rùn)洗密塞30min，加入氯仿50ml稱重，水浴65℃回流3h，冷卻后，氯仿補(bǔ)足失重，得提取液；所述提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加甲醇5ml溶解，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，所得?濾液作為標(biāo)準(zhǔn)石斛樣品溶液；?

（2）色譜條件：色譜柱為C18反相色譜柱；流動(dòng)相：乙腈和水梯度洗脫；體積流量：1ml/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；進(jìn)樣量：5-10ul；分析時(shí)間：62min；?

梯度洗脫程序如下?

時(shí)間（min） 乙腈（%） 水（%） 0 20 80 50 80 20 52 20 80 62 20 80

所述流動(dòng)相中加有終濃度0.005%氨水；?

（3）標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的獲得，將步驟1）所述的標(biāo)準(zhǔn)石斛樣品溶液按步驟2）所述的色譜條件進(jìn)行高效液相色譜分析，獲得對(duì)應(yīng)石斛樣品的生物堿類標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。?