[發明專利]一種用作重組豬干擾素α1的凍干保護劑及其制備方法

無效

• 申請號: 201310526190.6
• 申請日: 2013-10-29
• 公開（公告）號: CN103585633A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 王明麗;趙俊;王彩玲;關鑫
• 申請（專利權）人: 王明麗;趙俊
• 主分類號: A61K47/26
• 分類號: A61K47/26;A61K47/10;A61K38/21
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

技術領域

本發明主要涉及一種用作重組豬干擾素α1的凍干保護劑及其制備方法，尤屬于治療性獸用生物制品生產工藝技術領域。

背景技術

冷凍干燥是目前保持微生物、動物組織、細胞及蛋白質等物質生物活性的一個有效的、方法。制品經完全凍結并在一定的真空條件下使冰晶升華，從而達到低溫脫水的目的，此過程即稱為冷凍干燥，簡稱凍干，是冷凍和干燥的結合。

冷凍干燥技術具有與其他干燥方法無可比擬的優點，在低溫下干燥，各種成分、酶的活性喪失少，復水性好，保存期長，儲存運輸方便。但是，在真空冷凍干燥過程中，冷凍和干燥不可避免地會影響蛋白質的生物學活性。為防止在凍干過程中蛋白質的損失，人們在凍干過程中常添加糖、蛋白質、氨基酸等物質來起保護作用，保護劑可以改變生物樣品冷凍干燥時的物理、化學環境，減輕或防止冷凍干燥或復水對蛋白質的損失，盡可能保持原有的各種生理生化特性和生物活性，凍干保護劑還影響到保藏期間蛋白質的穩定性。目前干擾素產品的保護劑產品通常用的是白蛋白，而白蛋白價格昂貴導致干擾素產品生產成本提高。本發明通過多次試驗探索到一種能既能保護重組豬干擾素α1活性免受冷凍干燥過程多種因素的影響，又能降低成本的保護劑配方，非常適合重組豬干擾素α1凍干規模化生產需要。

發明內容

本發明目的就是提供一種用作重組豬干擾素α1凍干保護劑及其制備方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種用作重組豬干擾素α1凍干保護劑，包括以下組分及其在配伍時的初始濃度為：蔗糖90～300g/L、甘露醇300～600g/L和甘油100～400ml/L，溶劑為注射用水。

所述的蔗糖在凍干原液中的初始濃度為90～300g/L。

所述的甘露醇在凍干原液中的初始濃度為300～600g/L。

所述的甘油在凍干原液中的初始濃度為100～400mL/L。

一種用作重組豬干擾素α1的凍干保護劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）將上述重量份的各原料混合配制為凍干原液；

（2）高壓滅菌，充分混勻，即得所述用作重組豬干擾素α1凍干保護劑。

本發明的優點是：

第一：降低了生產成本。本發明凍干保護劑使用的蔗糖、甘露醇以及甘油等原材料價格均非常低廉。

第二：安全。本發明采用的蔗糖、甘露醇以及甘油等原材料均可通過高壓蒸汽滅菌。

第三：保存期長，易于儲存。

具體實施方式

實施例1

（1）取rPoIFNα1原液若干。

（2）按照蔗糖90～300g/L、甘露醇300～600g/L和甘油100～400ml/L配制為凍干原液。

（3）將配方原液配制好后，高壓滅菌，充分混勻。

（4）將高壓滅菌后的配方原液和rPoIFNα1原液按照3:1的比例混勻,分裝，加好橡膠塞蓋子，放入凍干機凍干。

（5）凍干結束后，壓蓋，關掉凍干機。

（6）rPoIFNα1凍干品質量檢驗

隨機抽取不同批次rPoIFNα1凍干品分別按照以下方案檢測，結果表明采用本凍干保護劑配方凍干后的rPoIFNα1成品質量均合格（如表1所示）。

無菌檢驗：按《中國生物制品規程》通則《生物制品無菌試驗規程》A項進行；

安全性實驗：用體重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射0.5ml（rPoIFNα1凍干品溶于2ml生理鹽水），觀察7天，動物應健存，每只體重增加判為合格；

外觀檢測：觀察rPoIFNα1凍干品是否有塌縮、凹陷、缺損等現象，如無則判為合格；

復溶效果監測：取rPoIFNα1凍干品加生理鹽水2ml，1min后觀察是否完全溶解以及有無無肉眼可見顆粒，如無則判為合格；

含水量檢測，是利用費休氏法測定，低于3%判為合格。

（7）rPoIFNα1凍干品37℃保存穩定性試驗

如表2所示：隨機抽取各批次干擾素，放置于37℃溫箱中，各時間點取樣，采用WISH細胞VSV檢測系統，以微量細胞病變抑制法測定樣品的效價，計算效價降低百分率，低于5%判為合格。通過檢測結果表明采用本凍干保護劑配方凍干后的rPoIFNα1成品37℃可穩定保存1個月以上。

（8）rPoIFNα1凍干品4℃保存穩定性試驗