[發(fā)明專(zhuān)利]畢赤酵母的培養(yǎng)基制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310525816.1
• 申請(qǐng)日: 2013-10-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103602601A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐麗
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 徐麗
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/16
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/16;C12R1/84
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種實(shí)驗(yàn)方法，具體來(lái)說(shuō)，畢赤酵母的培養(yǎng)基制備方法。?

背景技術(shù)

?畢赤酵母，是甲醇營(yíng)養(yǎng)型酵母中的一類(lèi)能夠利用甲醇作為唯一碳源和能源的酵母菌。與其它酵母一樣，在無(wú)性生長(zhǎng)期主要以單倍體形式存在，當(dāng)環(huán)境營(yíng)養(yǎng)限制時(shí)，常誘導(dǎo)2個(gè)生理類(lèi)型不同的接合型單倍體細(xì)胞交配，融合成雙倍體。畢赤酵母的另一個(gè)生物學(xué)特點(diǎn)是，甲醇代謝所需的醇氧化酶被分選到過(guò)氧化物酶體中，形成區(qū)域化。以葡萄糖作碳源時(shí)，菌體中只有1個(gè)或很少幾個(gè)小的過(guò)氧化物酶體，而以甲醇作碳源時(shí)，過(guò)氧化物酶體幾乎占到整個(gè)細(xì)胞體積的80%，AOX增至細(xì)胞總蛋白的35%-40%。因此，當(dāng)在A(yíng)OX基因前利用同源重組方式插入外源蛋白基因時(shí)，可獲得大量表達(dá)。同時(shí)，根據(jù)甲醇酵母這種可以形成過(guò)氧化物酶體的特性，既可利用該系統(tǒng)表達(dá)一些毒性蛋白和易被降解的酶類(lèi)，也可用以研究細(xì)胞特異區(qū)域化的生物發(fā)生及其機(jī)制和功能，為高等動(dòng)物類(lèi)似的研究提供啟示。?

發(fā)明內(nèi)容

為克服上述技術(shù)問(wèn)題，我們提出了以下技術(shù)方案：?

畢赤酵母的培養(yǎng)基制備方法，步驟如下：首先在平板中加入3-5%的瓊脂粉，隨后在115-130攝氏度條件下進(jìn)行高溫滅菌至少15分鐘；再加入100克葡萄糖，滅菌15分鐘或者過(guò)濾除菌；在3-4攝氏度條件下靜置24小時(shí)候提純；再取適量瓊脂置于40攝氏度的純凈水中進(jìn)行冷卻、保溫；加入至提純后的瓊脂粉中，混合，振蕩，搖勻；再在無(wú)菌水中滅菌；再次提純即可。

本發(fā)明中，可以加入10毫升H母液。?

本發(fā)明中，所述無(wú)菌水需要保持在35-36攝氏度。?

本發(fā)明的有益效果是，成本低，對(duì)環(huán)境污染小，可以作為大量制備GK8?的途徑。?

具體實(shí)施方式

畢赤酵母的培養(yǎng)基制備方法，步驟如下：首先在平板中加入4%的瓊脂粉，隨后在120攝氏度條件下進(jìn)行高溫滅菌至少15分鐘；再加入100克葡萄糖，滅菌15分鐘或者過(guò)濾除菌；在3攝氏度條件下靜置24小時(shí)候提純；再取適量瓊脂置于40攝氏度的純凈水中進(jìn)行冷卻、保溫；加入至提純后的瓊脂粉中，混合，振蕩，搖勻；再在無(wú)菌水中滅菌；再次提純即可，加入10毫升H母液，所述無(wú)菌水需要保持在35攝氏度。?

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。?