[發(fā)明專利]大腸桿菌細(xì)胞的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310525800.0
• 申請(qǐng)日: 2013-10-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103602612A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 徐麗
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/19
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種實(shí)驗(yàn)方法，具體來(lái)說(shuō)，大腸桿菌細(xì)胞的制備方法。?

背景技術(shù)

腸埃希氏菌(E.?coli)通常稱為大腸桿菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的，在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)，一直被當(dāng)作正常腸道菌群的組成部分，認(rèn)為是非致病菌。直到20世紀(jì)中葉，才認(rèn)識(shí)到一些特殊血清型的大腸桿菌對(duì)人和動(dòng)物有病原性，尤其對(duì)嬰兒和幼畜（禽），常引起嚴(yán)重腹瀉和敗血癥，它是一種普通的原核生物，根據(jù)不同的生物學(xué)特性將致病性大腸桿菌分為5類：致病性大腸桿菌(EPEC)、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(ETEC)、腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、腸出血性大腸桿菌(EHEC)、腸黏附性大腸桿菌(EAEC)。大腸桿菌屬于細(xì)菌。大腸桿菌是與我們?nèi)粘Ｉ铌P(guān)系非常密切的一類細(xì)菌，學(xué)名稱作“大腸埃希菌”，屬于腸道桿菌大類中的一種。它是寄生在人體大腸里對(duì)人體無(wú)害的一種單細(xì)胞生物，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，繁殖迅速，培養(yǎng)容易，它是生物學(xué)上重要的實(shí)驗(yàn)材料。在嬰兒剛出生的幾小時(shí)內(nèi)，大腸桿菌就經(jīng)過(guò)吞咽在腸道內(nèi)定居了。正常情況下，大多數(shù)大腸桿菌是非常安分守己的，他們不但不會(huì)給我們的身體健康帶來(lái)任何危害，反而還能競(jìng)爭(zhēng)性抵御致病菌的進(jìn)攻，同時(shí)還能幫助合成維生素K2，與人體是互利共生的關(guān)系。只有在機(jī)體免疫力降低、腸道長(zhǎng)期缺乏刺激等特殊情況下，這些平日里的良民才會(huì)興風(fēng)作浪，移居到腸道以外的地方，例如膽囊、尿道、膀胱、闌尾等地，造成相應(yīng)部位的感染或全身播散性感染。因此，大部分大腸桿菌通常被看作機(jī)會(huì)致病菌。?

發(fā)明內(nèi)容

為克服上述技術(shù)問(wèn)題，我們提出了以下技術(shù)方案：?

大腸桿菌細(xì)胞的制備方法，步驟如下：首選挑選合適的細(xì)胞菌落，然后將DH5平板劃線，在35攝氏度環(huán)境下過(guò)夜；其后將菌落接種于菌液中，并導(dǎo)入離心管中；隨后在35攝氏度的培養(yǎng)箱中過(guò)夜；加入10%瓊脂；250rpm搖床過(guò)夜；加入100ml的氯化鈣溶液；混懸菌液，離心分離；將上清去除干凈即可。

本發(fā)明中，保存的時(shí)候可以滴入適量甘油。?

本發(fā)明中，所述氯化鈣溶液需要提前預(yù)冷，并保存在攝氏度4度的環(huán)境中。?

本發(fā)明的有益效果是，成本低，對(duì)環(huán)境污染小，同時(shí)獲得的基因擴(kuò)增可以得到確認(rèn)。?

具體實(shí)施方式

大腸桿菌細(xì)胞的制備方法，步驟如下：首選挑選合適的細(xì)胞菌落，然后將DH5平板劃線，在35攝氏度環(huán)境下過(guò)夜；其后將菌落接種于菌液中，并導(dǎo)入離心管中；隨后在35攝氏度的培養(yǎng)箱中過(guò)夜；加入10%瓊脂；250rpm搖床過(guò)夜；加入100ml的氯化鈣溶液；混懸菌液，離心分離；將上清去除干凈即可，保存的時(shí)候可以滴入適量甘油。所述氯化鈣溶液需要提前預(yù)冷，并保存在攝氏度4度的環(huán)境中。?

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。?