[發明專利]dsRNA及其組合在控制蚜蟲危害中的應用有效

申請號：	201310525143.X	申請日：	2013-01-09
公開（公告）號：	CN103571844A	公開（公告）日：	2014-02-12
發明（設計）人：	夏蘭琴;張珉;李雪峰	申請（專利權）人：	中國農業科學院作物科學研究所
主分類號：	C12N15/113	分類號：	C12N15/113;A01N57/16;A01P7/04
代理公司：	北京紀凱知識產權代理有限公司 11245	代理人：	關暢
地址：	100081 北京市海淀***	國省代碼：	北京;11
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摘要：
搜索關鍵詞：	dsrna 及其組合控制蚜蟲危害中的應用
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【說明書】：

該申請是對申請日為2013年1月9日、申請號為201310007173.1、發明名稱為“dsRNA及其組合在控制蚜蟲危害中的應用”的專利申請的分案申請

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及dsRNA及其組合在控制蚜蟲危害中的應用。

背景技術

麥蚜（尤其是麥長管蚜）是危害中國小麥生產的主要害蟲之一，據統計，中國每年小麥蚜蟲危害面積可高達0.17億公頃，占小麥總種植面積的62%，造成減產15%—30%，嚴重時可高達50%。近年來，由于全球氣候變暖、耕作制度變化等因素，使蚜蟲的繁殖能力和適應性顯著增強，其危害日趨嚴重。目前，蚜蟲防治以噴灑農藥為主，但大量使用農藥，不僅對人畜有害，而且造成了嚴重的環境污染。培育抗蚜蟲小麥和蔬菜品種是防止蚜蟲危害的最有效途徑，但由于現有種質資源中缺乏有效的抗蚜基因，抗性機制尚不明確，常規育種難以奏效。挖掘和利用新型抗蚜基因并通過基因工程培育小麥抗蚜新種質具有重要意義。

植物介導的RNAi技術已成為農作物抗蟲基因工程的熱點之一，通過寄主植物表達相應昆蟲特異基因的dsRNA，昆蟲取食植物后沉默其相應的基因從而達到控制害蟲危害的目的。RNAi現象其作用過程是雙鏈RNA（dsRNA）進入生物體內，被Dicer酶切割成21—23nt的siRNA，siRNA與RNA誘導沉默復合物結合，與互補序列的靶mRNA結合，被Dicer識別，造成靶基因表達量的下降。近年來，利用dsRNA體外飼喂或注射來篩選RNA靶標基因，導致靶標基因表達和沉默，已經廣泛應用于昆蟲生長發育關鍵基因的鑒定和功能分析。孟山都公司通過植物介導的昆蟲腸道特異基因RNAi技術成功獲得了抗玉米根螟的轉基因玉米，有效緩解了長期應用Bt轉基因玉米誘發昆蟲產生抗性等問題，目前已完成生產性試驗。棉鈴蟲腸道中特異P450基因可提高棉鈴蟲幼蟲對棉花次生代謝物質和棉酚的耐受性，試驗表明，利用表達棉鈴蟲P450基因dsRNA的轉基因煙草和棉花葉片飼喂棉鈴蟲幼蟲，可導致幼蟲體內P450基因的表達量下降，同時幼蟲發育受阻，表現出抗棉鈴蟲性能；Zha等從褐飛虱中腸中克隆了3個高度表達的基因：NlHT1、Nlcar和Nltry，構建載體，轉化水稻，褐飛虱取食轉基因水稻后，體內3種基因的mRNA表達水平下降了40%到70%，并且在水稻的篩管部發現了dsRNA和siRNA的存在。Pitino等將桃蚜的MpC002（主要在唾液腺中表達）和Rack-1（主要在腸道中表達）2個基因分別導入煙草和擬南芥中，用轉基因植物飼喂桃蚜，導致桃蚜體內的MPC002或Rack-1的表達量降低了高達60%，蚜蟲的產仔數目減少。

小麥抗蚜蟲種質資源缺乏，抗性機制尚不明確，常規育種難以奏效，每年給農業生產造成巨大經濟損失。迫切需要挖掘和鑒定新型抗蚜基因并通過基因工程育種提高小麥抗蚜特性。

發明內容

本發明的一個目的是提供了dsRNA。

本發明提供的dsRNA，為如下1）、2）或3）：

1）由序列表中序列4所示的核苷酸和其反向互補序列所示的核苷酸組成的雙鏈RNA；

2）由序列表中序列5所示的核苷酸和其反向互補序列所示的核苷酸組成的雙鏈RNA；

3)由如下兩條雙鏈RNA組成：1）所示的雙鏈RNA和2）所示的雙鏈RNA。

上述3)所示的dsRNA中，1）所示的雙鏈RNA和2）所示的雙鏈RNA的質量比為1:1。

上述1）、2）或3）所示的所述dsRNA的編碼基因也是本發明保護的范圍，具體如下：

1）所示的dsRNA的編碼基因具體為序列表中序列1所示的核苷酸；

2）所示的dsRNA的編碼基因具體為序列表中序列2所示的核苷酸；

3）所示的dsRNA的編碼基因具體為由序列表中序列1所示的核苷酸所示的DNA分子和序列表中序列2所示的核苷酸所示的DNA分子組成的組合物。