[發(fā)明專利]一株粘質(zhì)沙雷氏菌及其在降解二苯并噻吩中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310525022.5
• 申請(qǐng)日: 2013-10-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103555626A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 包春云;徐元;劉惠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;B09C1/10;C02F3/34;C12R1/43;C02F101/30
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物在環(huán)境污染物降解中的應(yīng)用領(lǐng)域，涉及一株二苯并噻吩降解菌及其在環(huán)境污染控制中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

除了煉焦廢水中含有有機(jī)硫雜環(huán)化合物如二苯并噻吩等，二苯并噻吩是原油硫雜質(zhì)中的主要成分，在一些石油中占據(jù)總硫的40%－70%。石油、石化產(chǎn)品以及煉焦生產(chǎn)在生產(chǎn)、運(yùn)輸以及使用過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量污染，如土壤及地下水的污染以及大量的廢水，二苯并噻吩作為一種主要的污染物之一的降解對(duì)于土壤生物修復(fù)以及石化污水、煉焦廢水的處理具有重要意義。?

生物治理是微生物利用污染物作為碳源或其他營(yíng)養(yǎng)源如氮源、硫源等，將其分解利用轉(zhuǎn)化為二氧化碳、水以及無(wú)機(jī)礦物質(zhì)等。生物治理/處理因?yàn)槌杀镜汀⒉僮骱?jiǎn)單、條件溫和以及無(wú)二次污染等優(yōu)勢(shì)，在土壤生物修復(fù)以及石化污水、煉焦廢水的處理的過(guò)程中具有絕對(duì)的優(yōu)勢(shì)，篩選、獲得具有對(duì)二苯并噻吩具有快速降解能力的高效微生物菌株，可以將其投加于待修復(fù)的土壤以及污水處理中，來(lái)大幅提高污染物降解的效果，這對(duì)保護(hù)生態(tài)具有重要意義。?

一般來(lái)說(shuō)生物降解菌要求具有對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求低、生長(zhǎng)速度快、降解速度快等優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明提供的一株二苯并噻吩降解菌具有上述優(yōu)勢(shì)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株可降解二苯并噻吩的菌株及其應(yīng)用。?

本發(fā)明從中國(guó)某油田污泥中以二苯并噻吩為唯一硫源篩選得到的粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia?marcescens）菌株具有快速降解二苯并噻吩的能力。在二苯并噻吩為唯一硫源的選擇性固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)有粉紅色菌落，于30℃左右生長(zhǎng)。?

該菌株為粘質(zhì)沙雷氏菌S2（Serratia?marcescens?S2），保藏號(hào)CGMCC?No.3654。?

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該菌株的應(yīng)用方法：降解含二苯并噻吩污染物。?

本發(fā)明提供的粘質(zhì)沙雷氏菌S2（Serratia?marcescens?S2），生長(zhǎng)迅速、容易成為優(yōu)勢(shì)菌株、可高效、快速降解二苯并噻吩，適合進(jìn)行石油、煉焦廢水的處理以及石油污染土壤和地下水的修復(fù)。通過(guò)下面的詳細(xì)描述，本發(fā)明這些方面的特征和優(yōu)點(diǎn)將更為清楚。?

本發(fā)明中，除非特別指明，術(shù)語(yǔ)“含二苯并噻吩污染物”是指工業(yè)過(guò)程中產(chǎn)生的明顯含有二苯并噻吩的石化、煉焦三廢或者石油污染土壤、地下水等。?

具體實(shí)施方式

（1）培養(yǎng)基?

基本鹽溶液(BSM)：KH₂PO₄:2.5g,NaHPO₄·12H₂0:12.0g,MgCl₂·6H₂O:0.8g,NH₄Cl:2.0g,CaCl₂:0.07g,FeCl₃·6H₂O:0.1g,MnCl₄·4H₂O:0.4g，溶于1000ml去離子水中，制成鹽溶液。?

富集、篩選培養(yǎng)基：BSM溶液中加入甘油15.0g/L，二苯并噻吩800mg/L。?

固體培養(yǎng)基：BSM溶液中加入甘油15.0g/L，二苯并噻吩800mg/L，固體培養(yǎng)基中加入20g/L瓊脂，濕熱滅菌備用，條件改變另作說(shuō)明。?

二苯并噻吩人工廢水：BSM溶液中加入甘油5.0g/L，二苯并噻吩800mg/L。?

（2）菌株的篩選與分離純化?

來(lái)自煉油廠的土壤置于250ml三角燒瓶中30℃搖床活化2天后用移液管移取10ml加入富集培養(yǎng)基中，于搖床培養(yǎng)三天后4000rpm離心5分鐘，倒掉上清液，部分底部泥菌轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的新鮮富集培養(yǎng)基，如此每三天重復(fù)一次，共3次。然后移取適量馴化菌液進(jìn)行稀釋涂布平板，于30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)后選取數(shù)量多、長(zhǎng)勢(shì)良好、外觀不同的菌落，進(jìn)行多次劃線分離純化得到純種菌株，將純化的菌株接種斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后于4℃冰箱保藏，每隔3-4個(gè)月轉(zhuǎn)接一次。?

（3）菌株的分子生物學(xué)鑒定?