[發明專利]鑒定大麗輪枝菌致病型的試劑盒和基因及其方法

有效

• 申請號: 201310524848.X
• 申請日: 2013-10-30
• 公開（公告）號: CN103525832A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 戴小楓;陳捷胤;徐明;馬雪峰;李蕾;孔志強;包郁明;肖紅利;桂月晶
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農產品加工研究所
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12Q1/68;C12R1/645
• 代理公司: 北京英創嘉友知識產權代理事務所(普通合伙) 11447
• 代理人: 王浩然;桑傳標

技術領域

本發明涉及農作物病害防治領域，具體地，涉及一種高致病性大麗輪枝菌(Verticillium?dahliae)基因、一種鑒定大麗輪枝菌致病型的方法和試劑盒。

背景技術

大麗輪枝菌(Verticillium?dahliae)是一種植物致病真菌，它可以導致植物（特別是棉花）發生黃萎病。但是，不同致病型的大麗輪枝菌菌株的致病表現差別很大，例如某些高致病型的菌株感染棉花后會導致棉花的嚴重病害而引起農田產量的下降，而某些低致病型的菌株感染棉花后僅導致棉花的輕微病害且對農田產量影響較小。此外，大麗輪枝菌的致病型還表現出一定的潛伏性，即高致病型菌株在感染當年可能不致病，而在次年大范圍地嚴重致病。

如果能夠檢測出農田中大麗輪枝菌的主要菌株類型，并對其致病型作出準確的判斷，就可以結合藥物防治和輪作等農業手段抑制病害的發生，從而增加經濟效益和社會效益。

發明內容

本發明的目的是解決如何準確判斷大麗輪枝菌菌株的致病型的技術問題，提供一種高致病性大麗輪枝菌(Verticillium?dahliae)基因、一種鑒定大麗輪枝菌致病型的方法和試劑盒。

SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列為本發明人發現的在高致病型的大麗輪枝菌菌株的基因組序列中出現而在低致病型的大麗輪枝菌的基因組序列中不出現的序列。因而，對于某一致病型待測的大麗輪枝菌菌株，只要鑒定該大麗輪枝菌菌株的基因組的序列中是否存在SEQ?ID?NO：1所示的序列，即可獲知該大麗輪枝菌菌株是否為高致病型大麗輪枝菌。具體地，如果鑒定出該大麗輪枝菌菌株的基因組的序列中不存在SEQ?ID?NO：1所示的序列，則判斷該大麗輪枝菌菌株不屬于高致病型；如果鑒定出該大麗輪枝菌菌株的基因組的序列中存在SEQ?ID?NO：1所示的序列，則判斷該大麗輪枝菌菌株屬于高致病型。并且，如果以該大麗輪枝菌菌株的全基因組DNA待測樣本為模板進行PCR擴增的產物中不存在SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列，就能夠充分證明該大麗輪枝菌菌株的基因組的序列中不存在SEQ?ID?NO：1所示的序列。由此，本發明的發明人得到了本發明的技術方案。

為了實現上述目的，一方面，本發明提供一種高致病性大麗輪枝菌(Verticillium?dahliae)基因，其中，該基因具有SEQ?ID?No：1所示的核苷酸序列。

另一方面，本發明還提供了一種鑒定大麗輪枝菌致病型的方法，該方法包括以下步驟：

（1）制備含有大麗輪枝菌的全基因組DNA的待測樣本；

（2）以步驟（1）中得到的全基因組DNA待測樣本為模板進行PCR擴增，檢測擴增產物中是否存在SEQ?ID?No.4所示的核苷酸序列；

（3）根據步驟（2）的檢測結果判斷大麗輪枝菌菌株的致病型，在所述擴增產物中中不存在SEQ?ID?No.4所示的核苷酸序列的情況下，則指示所述大麗輪枝菌的菌株不屬于高致病型；在所述擴增產物中存在具有SEQ?IDNO：4所示的核苷酸序列的情況下，則指示該大麗輪枝菌的菌株屬于高致病型。

另一方面，本發明還提供了一種試劑盒，所述試劑盒含有本發明提供的引物和PCR試劑。

本發明的其他特征和優點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。

具體實施方式

以下對本發明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本發明，并不用于限制本發明。

本發明提供一種高致病性大麗輪枝菌(Verticillium?dahliae)基因，其中，該基因具有SEQ?ID?No：1所示的核苷酸序列核酸。

本發明還提供了一種鑒定大麗輪枝菌致病型的方法，該方法包括以下步驟：

（1）制備含有大麗輪枝菌的全基因組DNA的待測樣本；

（2）以步驟（1）中得到的全基因組DNA待測樣本為模板進行PCR擴增，檢測擴增產物中是否存在SEQ?ID?No.4所示的核苷酸序列；

（3）根據步驟（2）的檢測結果判斷大麗輪枝菌菌株的致病型，在所述擴增產物中不存在SEQ?ID?No.4所示的核苷酸序列的情況下，則指示所述大麗輪枝菌的菌株不屬于高致病型；在所述擴增產物中存在具有SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列的情況下，則指示該大麗輪枝菌的菌株屬于高致病型。