[發(fā)明專利]一種熊膽粉純化方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310523280.X
• 申請日: 2013-10-30
• 公開（公告）號: CN103520210A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設計）人: 嚴忠貴;成傳英;向澤方
• 申請（專利權）人: 成都盛源堂生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/413
• 分類號: A61K35/413;A61K31/575
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種熊膽粉純化方法，其特征在于，包括如下順序進行的步驟：

（1）在新鮮提取的熊膽汁中加入聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和無菌水蒸餾水，震蕩混勻，靜置澄清，獲得上清液；

（2）在步驟（1）中所得上清液中加入2倍體積的無水乙醇，制得熊膽醇提物；

（3）將步驟（2）所得熊膽提純物加入大孔硅膠柱子，利用2倍體積75%無水乙醇分3次對硅膠柱子進行洗滌，收集洗滌液；

（4）用無菌蒸餾水對步驟（3）中所得洗滌液進行稀釋，使得無水乙醇的濃度為16.5％；

（5）將步驟（4）中所得含有16.5%無水乙醇的熊膽汁上清液加入到纖維素粉CF11柱子中，渦旋振蕩混勻，進行熊膽汁分離，5000rpm條件下，離心5min，離心結束后，在纖維素粉CF11柱子中加入等體積的無菌蒸餾水，5000rpm條件下，離心5min；

（6）收集步驟（5）中所得上清液，加入1/10體積的3mol/L?NaAc和等體積的異丙醇，混勻，-20℃沉淀，沉淀完成后，4℃條件下，12000rpm離心30min，棄上清，收集沉淀；

（7）加入75%無水乙醇對步驟（6）中收集的沉淀進行洗滌，洗滌結束后，在4℃環(huán)境下，12000rpm離心30min，棄上清，收集沉淀；

（8）將步驟（7）中所得沉淀，溶于蒸餾水中，攪拌1至3小時，制成熊膽溶液，調節(jié)pH為2至8，加熱至50℃并保持該溫度，加入復合蛋白酶，酶解結束后，滅酶，進行超濾膜過濾，獲得的上清液經噴霧干燥后即可獲得熊膽粉成品。

2.根據權利要求1所述的一種熊膽粉純化方法，其特征在于，所述步驟（1）中熊膽汁、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及無菌水蒸餾水的重量比為100：0.1～0.8：300～600，靜置時間為2～3h。

3.根據權利要求1所述的一種熊膽粉純化方法，其特征在于，所述步驟（5）中利用纖維素粉CF11柱子對熊膽汁進行分離包括以下步驟：

A)按照重量比為1：3.5：3.6：2.2：2.8的比例，將纖維素粉CF11粉末與氯化鈉、三羥甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸鈉、蒸餾水在攪拌作用下混合，制得纖維素粉CF11柱子；

B)?將含有16.5%無水乙醇的熊膽汁上清液加入到纖維素粉CF11柱子中，渦旋振蕩混勻，進行熊膽汁分離，5000rpm離心5min，離心結束后，在纖維素粉CF11柱子中加入等體積的無菌蒸餾水，5000rpm條件下，離心5min；

C)收集步驟B）中所得上清液。

4.根據權利要求1所述的一種熊膽粉純化方法，其特征在于，所述步驟（8）中復合蛋白酶為中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胰蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶及動物蛋白水解酶中的兩種或兩種以上的復合酶。

5.根據權利要求1所述的一種熊膽粉純化方法，其特征在于，所述步驟（8）中酶濃度與熊膽溶液之比為800U/g～6000U/g，酶解時間1～6h，上清液噴霧干燥過程中，控制過篩目數為120～160目，進風溫度為160℃～220℃，出風溫度為40℃～70℃，最大水分蒸發(fā)量為5Kg/h～2000Kg/h，霧化盤最大轉速為10000r/min～50000r/min。