[發(fā)明專利]一種純化、篩選優(yōu)化蛋白的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310523239.2
• 申請日: 2013-10-30
• 公開（公告）號: CN103601790A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設計）人: 徐麗
• 申請（專利權）人: 徐麗
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及一種實驗方法，具體來說，一種純化、篩選優(yōu)化蛋白的方法。

背景技術

質粒是真核細胞細胞核外或原核生物擬核區(qū)外能夠進行自主復制的遺傳單位，包括真核生物的細胞器（主要指線粒體和葉綠體）中和細菌細胞擬核區(qū)以外的環(huán)狀脫氧核糖核酸(DNA)分子。現在習慣上用來專指細菌(大腸桿菌）、酵母菌和放線菌等生物中細胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質粒常被用做基因的載體(Vector)。許多細菌除了擬核中的DNA外，還有大量很小的環(huán)狀DNA分子，這就是質粒(plasmid)（補充：部分質粒為RNA）。質粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環(huán)素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質粒稱為附加體(episome)，這類質粒能夠整合進真菌的染色體，也能從整合位置上切離下來成為游離于染色體外的DNA分子。質粒在宿主細胞體內外都可復制，通過個些特性，人們可以把一些目的DNA片斷構建在質粒中，通過轉化入大腸桿菌中，不斷的復制，來得到目的產物。這就是轉化的目的。

發(fā)明內容

為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案：

一種純化、篩選優(yōu)化蛋白的方法，首先誘導表達菌體破碎；然后將包涵體分離、洗滌、制備；第三步是將包涵體進行溶解；尿素梯度透析復性法對包涵體復性；重組蛋白偷襲；最后將重組蛋白冷凍干燥保存。

本發(fā)明中，所述誘導表達的過程，在水浴中超聲破菌，間隔10秒，反復不少于200次。

本發(fā)明中，包涵體進行溶解的時候，需要加入35mg/ml的終濃度緩沖液進行溶解沉淀，在15000rpm下進行離心30分鐘。

本發(fā)明的有益效果是，實驗簡單，費用較低，抗體的制備為將來檢測臨床器官和人工肝中的PERV的表達及傳播具有重要意義。

具體實施方式

一種純化、篩選優(yōu)化蛋白的方法，首先誘導表達菌體破碎；然后將包涵體分離、洗滌、制備；第三步是將包涵體進行溶解；尿素梯度透析復性法對包涵體復性；重組蛋白偷襲；最后將重組蛋白冷凍干燥保存。所述誘導表達的過程，在水浴中超聲破菌，間隔10秒，反復250次。包涵體進行溶解的時候，需要加入35mg/ml的終濃度緩沖液進行溶解沉淀，在15000rpm下進行離心30分鐘。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發(fā)明披露的技術范圍內，根據本發(fā)明的技術方案及其發(fā)明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內。