[發(fā)明專利]一種獲得ＰＣＲ擴(kuò)增片段的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310522527.6
• 申請(qǐng)日: 2013-10-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103602662A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 徐麗
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種實(shí)驗(yàn)方法，具體來(lái)說(shuō)，一種獲得ＰＣＲ擴(kuò)增片段的方法。

背景技術(shù)

質(zhì)粒是真核細(xì)胞細(xì)胞核外或原核生物擬核區(qū)外能夠進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳單位，包括真核生物的細(xì)胞器（主要指線粒體和葉綠體）中和細(xì)菌細(xì)胞擬核區(qū)以外的環(huán)狀脫氧核糖核酸(DNA)分子?，F(xiàn)在習(xí)慣上用來(lái)專指細(xì)菌(大腸桿菌）、酵母菌和放線菌等生物中細(xì)胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質(zhì)粒常被用做基因的載體(Vector)。許多細(xì)菌除了擬核中的DNA外，還有大量很小的環(huán)狀DNA分子，這就是質(zhì)粒(plasmid)（補(bǔ)充：部分質(zhì)粒為RNA）。質(zhì)粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環(huán)素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質(zhì)粒稱為附加體(episome)，這類質(zhì)粒能夠整合進(jìn)真菌的染色體，也能從整合位置上切離下來(lái)成為游離于染色體外的DNA分子。質(zhì)粒在宿主細(xì)胞體內(nèi)外都可復(fù)制，通過(guò)個(gè)些特性，人們可以把一些目的DNA片斷構(gòu)建在質(zhì)粒中，通過(guò)轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，不斷的復(fù)制，來(lái)得到目的產(chǎn)物。這就是轉(zhuǎn)化的目的。

發(fā)明內(nèi)容

為克服上述技術(shù)問(wèn)題，我們提出了以下技術(shù)方案：

一種獲得ＰＣＲ擴(kuò)增片段的方法，步驟如下：首先將對(duì)象ＰＣＲ加入模版DNA2ul,以及ddH2O36.5ul，并將混合物搖勻；待其混合均勻后放置86攝氏度的環(huán)境下進(jìn)行變性，時(shí)間1-6分鐘；再將混合物放置下列環(huán)境下：90-95攝氏度，18秒，55攝氏度，半分鐘，75攝氏度1分鐘；將上述步驟循環(huán)3次即得。

本發(fā)明中，所得PCR擴(kuò)增片段需要在21攝氏度條件下進(jìn)行保存。?

本發(fā)明的有益效果是，可以有效避免蛋白氨基酸丟失，且穩(wěn)定性好，表達(dá)量高，具有成本低，操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)。

具體實(shí)施方式

一種獲得ＰＣＲ擴(kuò)增片段的方法，步驟如下：首先將對(duì)象ＰＣＲ加入模版DNA2ul,以及ddH2O36.5ul，并將混合物搖勻；待其混合均勻后放置86攝氏度的環(huán)境下進(jìn)行變性，時(shí)間3分鐘；再將混合物放置下列環(huán)境下：92攝氏度，18秒，55攝氏度，半分鐘，75攝氏度1分鐘；將上述步驟循環(huán)3次即得。所得PCR擴(kuò)增片段需要在21攝氏度條件下進(jìn)行保存。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。