[發(fā)明專利]一種啟動子OsP006、制備方法及應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310521384.7
• 申請日: 2013-10-28
• 公開（公告）號: CN103627707A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發(fā)明（設計）人: 黃剛;汪杰;焦偉剛;閆智慧;范明君;廖加濤;曹玉潔;辛宜;楊爽
• 申請（專利權）人: 華大基因楊凌創(chuàng)新研究院有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;C12N1/21;C12N15/11;C12N5/10;C12N15/10;A01H5/00
• 代理公司: 陜西增瑞律師事務所 61219
• 代理人: 張瑞琪

技術領域

本發(fā)明涉及基因工程技術領域，特別涉及一種啟動子OsP006，含有該啟動子的核酸構建體、載體、重組細胞、植物愈傷組織，該啟動子的制備方法以及利用該啟動子來調(diào)控植物中基因表達的方法。

背景技術

啟動子是指基因中一段可與RNA聚合酶及其它一些影響轉(zhuǎn)錄的反式因子結合實現(xiàn)精確有效起始轉(zhuǎn)錄的DNA序列。植物基因表達（轉(zhuǎn)錄）的起始時間和表達的程度受啟動子的控制，啟動子的克隆及功能分析是植物基因表達調(diào)控研究的重要內(nèi)容，也是植物基因工程研究的一個重要方面。

根據(jù)啟動子的轉(zhuǎn)錄模式可將其分為3類：組成型啟動子、組織或器官特異性啟動子和誘導型啟動子。所謂組成型啟動子是指在組成型啟動子調(diào)控下，不同組織器官和發(fā)育階段的基因表達沒有明顯差異，因而稱之組成型啟動子。雙子葉植物中最常使用的組成型啟動子是花椰菜花葉病毒(CaMV)35S啟動子。雙子葉植物中的一些強效啟動子如CsVMV(Cassava?VeinMosaic?Virus)啟動子、番茄E8啟動子、白藜蘆醇合酶基因Vst1啟動子等高效啟動子，在單子葉植物中也有很強的基因調(diào)控作用。人們高度重視從植物本身克隆組成型啟動子。例如肌動蛋白(actin)和泛素(ubiquitin)等基因的啟動子已被克隆。用這些啟動子代替CaMV35S啟動子，可以更有效地在單子葉植物中驅(qū)動外源基因的轉(zhuǎn)錄。Naomi等分別從擬南芥的色氨酸合酶β亞基基因和植物光敏色素基因中克隆了相應啟動子，用其代替CaMV35S啟動子，在轉(zhuǎn)基因煙草中也取得了很好的表達效果(Plant?biotechnology，2002，19(1)：19-26)。

單子葉植物基因中常見的啟動子有：Ubi啟動子(Plant?ubiquitin?promoter)、Actin啟動子(Plant?Actin?promoter)和Adh-1啟動子(Maize?alcohol?dehydrogenase1promoter)。

Ubi啟動子以其啟動效率高、甲基化程度低、遺傳性狀穩(wěn)定等因素而倍受青睞。目前，已經(jīng)從很多泛素基因中分離得到啟動子序列，包括玉米基因組中的Ubi-1啟動子、水稻泛素RUBQ2啟動子、擬南芥泛素啟動子、向日葵泛素UbB1啟動子、煙草泛素Ubi.U4啟動子、馬鈴薯泛素Ubi7啟動子、番茄泛素Ubi1-1啟動子，大麥泛素Mub1啟動子。玉米泛素Ubi-1啟動子已經(jīng)廣泛地應用于玉米、小麥、水稻等單子葉植物中，水稻泛素RUBQ2啟動子在水稻和甘蔗中也有較多的應用。

Actin啟動子1990年由康奈爾大學的McElroy等首次在水稻中發(fā)現(xiàn)，屬于強組成型啟動子。Actin啟動子在單子葉禾本科中作用顯著，但是鄰近科屬的植物中的基因調(diào)控功能卻十分不理想。因此，許多相關研究通過其他單子葉植物尋找Actin啟動子，并成功在香蕉、甜瓜、玉米和擬南芥中陸續(xù)發(fā)現(xiàn)。Actin啟動子由于對基因表達的強調(diào)控作用，在單子葉植物優(yōu)良性狀的轉(zhuǎn)基因中已經(jīng)得到越來越廣泛的應用。

Adh-1啟動子調(diào)控ADH(alcohol?dehydrogenase)基因，對植物在缺氧環(huán)境下乙醇脫氫酶的表達至關重要。Adh-1啟動子對單子葉植物特別是谷類植物如水稻、燕麥和大麥，和少部分雙子葉植物如煙草，基因的調(diào)控功能比CaMV(花椰菜花葉病毒CaMV)35S啟動子提高10-50倍。Adh-1啟動子主要應用于單子葉植物，對絕大部分雙子葉植物基因表達的調(diào)控效果都很有限。

本發(fā)明人通過對水稻基因組的深入研究，提供一種新的單子葉植物啟動子，該啟動子能夠用于調(diào)控單子葉植物中目的基因的表達，同時為研究單子葉植物中目的基因表達提供一種新的工具和選擇。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種新的啟動子，能夠在植物中調(diào)控基因的表達。

本發(fā)明的另一目的在于提供含有上述啟動子的核酸構建體、載體、重組細胞、植物愈傷組織、植物外植體及植物。

本發(fā)明的再一目的在于提供一種制備上述啟動子的引物、制備方法，以及一種利用該啟動子來調(diào)控植物中基因表達的方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供一種制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，以及上述啟動子在調(diào)控植物中目的基因表達或植物育種中的用途。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術方案：

本發(fā)明公開了一種啟動子，所述啟動子含有選自以下任意一組并具有啟動子功能的核苷酸序列：

a、Seq?ID?No.1所示的核苷酸序列；

b、與Seq?ID?No.1互補的核苷酸序列；