[發明專利]花生AhFRDL1基因在提高植物抗鋁毒脅迫中的應用

在審

• 申請號: 201310520847.8
• 申請日: 2013-10-29
• 公開（公告）號: CN104561026A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 左元梅;邱巍;紀春巧;熊宏春;郭笑彤
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;C12N15/84;A01H5/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.花生檸檬酸轉運蛋白基因AhFRDL1在提高植物抗鋁毒脅迫中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述應用為將所述花生檸檬酸轉運蛋白基因AhFRDL1或含所述花生檸檬酸轉運蛋白基因AhFRDL1的重組表達載體轉入植物細胞中，篩選轉基因植物，使轉基因植物表達花生檸檬酸轉運蛋白。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述花生檸檬酸轉運蛋白基因AhFRDL1具有（1）或（2）所示的核苷酸序列：

（1）SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列；

（2）SEQ?ID?No.1所示的核苷酸序列經取代、缺失或添加一個或幾個核苷酸而形成的具有同等功能的核苷酸序列。

4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述含花生檸檬酸轉運蛋白基因AhFRDL1的重組表達載體為pBAR1-AhFRDL1。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述重組表達載體為pBAR1-AhFRDL1的構建方法如下：

（1）提取花生樣品RNA并反轉錄獲得cDNA，以cDNA為模板，以AhFRDL1-F和AhFRDL1-R為引物，進行PCR；

AhFRDL1-F：5’-TGGTAGAGAAAATGGCTGAGAAG-3’；

AhFRDL1-R：5’-AACATGATTGCATTCATCTCCAT-3’；

（2）將步驟（1）得到的PCR產物克隆連接到pMD20-T載體上，獲得載體pMD20-T-AhFRDL1；

（3）以載體pMD20-T-AhFRDL1為模板，以35s-AhFRD1-F和35s-AhFRD1-R為引物，進行PCR；

35s-AhFRD1-F：5’-ACGCCCCGGGATGGCTGAGAAGCAG-3’；

35s-AhFRD1-R：5’-CGGGATCCTTTCTCCATAGGAATTCCCAAG-3’；

（4）將步驟（3）得到的PCR產物克隆到pGEM-T載體中，獲得載體pGEM-T-AhFRDL1；

（5）將載體pGEM-T-AhFRDL1和pBAR1同時用XmaI和BamHI進行雙酶切，回收AhFRDL1目的片段和pBAR1載體片段，連接，構建重組表達載體pBAR1-AhFRDL1。

6.根據權利要求1-5任一項所述的應用，其特征在于，所述植物為花生、擬南芥。