[發明專利]基于HBcAg載體的沙眼衣原體主要外膜蛋白表位疫苗及其用途

在審

• 申請號: 201310520055.0
• 申請日: 2013-10-15
• 公開（公告）號: CN104558196A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 張麗芳;朱珊麗;薛向陽;李文姝;陳韶;陳俊;林曉云
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/10;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/118;A61P31/04
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1.一種嵌合氨基酸序列，所述序列由包括野生的或經改造修飾的乙肝核心抗原蛋白，以及由下列成員中的一個或多個連接而成肽段序列：?

(a)沙眼衣原體主要外膜蛋白n個免疫優勢表位的氨基酸序列(n≥1)?

(b)i個柔性氨基酸組成的短肽序列(i≥0)。?

2.如權利要求1所述的嵌合氨基酸，其特征在于，所述的沙眼衣原體主要外膜蛋白表位多肽是下列成員及連續具有其所含n個氨基酸(n≥5)的衍生物之一：?

(1)免疫優勢表位多肽1氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示?

(2)免疫優勢表位多肽2氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示?

(3)免疫優勢表位多肽3氨基酸序列如SEQ?ID?NO：3所示。?

3.如權利要求2所述的免疫優勢表位多肽1，其特征在于，編碼該多肽的核苷酸序列是經原核密碼子優化修飾的，序列選自：SEQ?ID?NO：4和SEQ?ID?NO：7。?

4.如權利要求2所述的免疫優勢表位多肽2，其特征在于，編碼該多肽的核苷酸序列是經原核密碼子優化修飾的，序列選自：SEQ?ID?NO：5和SEQ?ID?NO：8。?

5.如權利要求2所述的免疫優勢表位多肽3，其特征在于，編碼該多肽的核苷酸序列是經原核密碼子優化修飾的，序列選自：SEQ?ID?NO：6和SEQ?ID?NO：9。?

6.如權利要求1所述的嵌合氨基酸，其特征在于，所述的原始的或經改造修飾的乙肝核心抗原蛋白是下列成員之一：?

(1)SEQ?ID?NO：10所示氨基酸序列?

(2)SEQ?ID?NO：11所示氨基酸序列。?

7.編碼權利要求1所述的乙肝核心抗原-沙眼衣原體主要外膜蛋白表位嵌合氨基酸的DNA序列。?

8.制備乙肝核心抗原-沙眼衣原體主要外膜蛋白表位嵌合DNA的方法，是利用PCR的方法分別擴增出野生乙肝核心抗原蛋白和經改造的乙肝核心抗原蛋白所對應的基因序列，再將沙眼衣原體主要外膜蛋白表位(如序列SEQ?ID?NO：1，SEQ?ID?NO：2，SEQ?ID?NO：3所示)以一定的方式插入，分別插入到上述乙肝核心抗原的相同或不同的許可位點，如C端、N端和MIR區等。?

9.根據權利要求8所述的插入優化方式，其特征在于：單表位重復插入，單表位經柔性氨基酸組成的短肽間隔后重復插入，不同單表位組合串聯插入，不同單表位組合串聯重復插入，不同單表位經柔性氨基酸組成的短肽間隔后組合串聯插入，不同單表位經柔性氨基酸組成的?短肽間隔后組合串聯重復的方式插入。?

10.如權利要求8所述的乙肝核心抗原的相同或不同的許可位點，其特征在于，原始的和經改造修飾的HBcAg的MIR區，或替換HBcAg第78-83位氨基酸之間的任意n個氨基酸(1≤n≤6)，或插入經改造修飾HBcAg的氨基端和羧基端，成為一個人工基因，并將該基因在表達載體系統中表達后純化，得到乙肝核心抗原-沙眼衣原體主要外膜蛋白表位嵌合氨基酸。?

11.一種重組載體，所述載體包含權利要求7所述的嵌合DNA序列；一種遺傳工程化的宿主細胞，所述宿主細胞含有所述的載體。?

12.如權利要求1所述的嵌合氨基酸序列、權利要求11所述的重組載體和宿主細胞在制備用于預防或治療沙眼衣原體相關疾病的嵌合疫苗中的用途。?

13.一種組合物，其包含有效量的權利要求11所述的重組載體和藥學上或免疫學上可接受的載體、賦形劑或佐劑；及一種抗體，其特征在于，所述的抗體特異性地與權利要求2所述的表位多肽結合。?