[發明專利]一種化學誘變釀酒酵母基因工程菌提高重組質粒穩定性的方法

無效

• 申請號: 201310519928.6
• 申請日: 2013-10-29
• 公開（公告）號: CN103555710A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 查向東;馬利娟;趙大偉;余忠麗;車媛媛;徐雪嬌
• 申請（專利權）人: 貴州省福泉市福中福農牧有限公司
• 主分類號: C12N15/01
• 分類號: C12N15/01;C12N1/19;C12R1/865
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強

1.一種化學誘變釀酒酵母基因工程菌提高重組質粒穩定性的方法，包括如下步驟：

1）化學誘變；

2）篩選；

3）PCR檢測質粒穩定性；

4）誘導表達與活性檢測。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）所述誘變的操作為：取含重組質粒的釀酒酵母基因工程菌懸浮液加入誘變劑DES，超聲波處理后，將誘變液加入硫代硫酸鈉溶液中終止反應。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟1）的具體操作為：取含重組質粒pYES2-α-G13的釀酒酵母基因工程菌懸浮液加入誘變劑DES使其終濃度為2%（v/v），超聲波處理10～20min后，將誘變液加入25%的硫代硫酸鈉溶液中終止反應。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2）所用的篩選劑為五氟尿嘧啶，具體操作為，將步驟1）誘變后的菌液涂布于含五氟尿嘧啶的SC-U固體培養基上進行篩選。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述SC-U固體培養基中五氟尿嘧啶的濃度為20?μmol/L。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3）的具體操作為：于篩選板上挑選單個菌落接種于完全培養基培養，分別在培養24h、48h、72h、96h、120h、144h時做菌液PCR反應，檢測質粒的穩定性。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述釀酒酵母基因工程菌為含有重組質粒pYES2-α-G13的釀酒酵母基因工程菌，所述重組質粒pYES2-α-G13表達抗菌肽G13。