[發(fā)明專利]一種生產(chǎn)低聚果糖的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310512152.5
• 申請日: 2013-10-28
• 公開（公告）號: CN104232706A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李國文;趙洪濤;袁偉崗
• 申請（專利權(quán)）人: 山東文遠(yuǎn)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12P19/18
• 分類號: C12P19/18;C12P19/00;C12N11/10;C12N11/08;C12N11/04
• 代理公司: 山東舜天律師事務(wù)所 37226
• 代理人: 李新海

1.一種生產(chǎn)低聚果糖的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）固定化果糖基轉(zhuǎn)移酶培養(yǎng)，包括以下步驟：選取具有能分泌果糖基轉(zhuǎn)移酶的優(yōu)良菌株，在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，然后將培養(yǎng)得到的大量菌絲體進(jìn)行破壁，用離心法和超濾法等將酶分離純化，果糖基轉(zhuǎn)移酶的酶液經(jīng)HPLC測定酶活力之后，按照每100-150U酶液加入0.5-1.5g的大孔陰離子交換樹脂載體，攪拌混勻，加入0.08-0.15%的戊二醛溶液，后再加入0.02-0.04%的氯化鈣溶液，調(diào)ph6.5-7.2，30℃下交聯(lián)反應(yīng)8-12h，后過濾，洗滌，既得固定化果糖基轉(zhuǎn)移酶；

（2）固定化酵母細(xì)胞培養(yǎng)，包括以下步驟：選取能分泌葡萄糖轉(zhuǎn)移酶的酵母菌種，在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將發(fā)酵培養(yǎng)的酵母細(xì)胞經(jīng)過離心制得酵母細(xì)胞濕菌體，將海藻酸鈉配成6—8%的溶液，經(jīng)消毒處理后，與濕菌體按比例在真空條件下混勻，然后利用壓力噴霧法使混合液通過孔徑為0.6mm的噴嘴，均勻落入10%的氯化鈣溶液中，形成直徑為2-3mm范圍內(nèi)的凝膠珠，硬化20-30分鐘后，過濾分離得到固定化酵母細(xì)胞；

（3）通過分批反應(yīng)法或柱式反應(yīng)法利用固定化果糖基轉(zhuǎn)移酶、固定化酵母細(xì)胞生產(chǎn)低聚果糖，包括以下步驟：按照分批反應(yīng)法，在反應(yīng)罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基轉(zhuǎn)移酶，控制反應(yīng)液ph5-6，溫度48℃-55℃，反應(yīng)10h左右，進(jìn)行過濾，將過濾液稀釋25%，加入8%的固定化酵母細(xì)胞，控制反應(yīng)液ph5-6，溫度28℃-35℃，反應(yīng)10h左右，即可獲得含量70%—90%的FOS產(chǎn)品，反應(yīng)結(jié)束，用篩網(wǎng)過濾反應(yīng)液，可以分離回收固定化酶，用于下一批原料的生產(chǎn)；按照柱式反應(yīng)法，將固定化果糖基轉(zhuǎn)移酶裝入柱中，以20%—60%（w/w）的蔗糖溶液在ph4.5-7.5，溫度30—55℃下通過此柱，調(diào)節(jié)蔗糖溶液的流量0.1-3m³/h下通過此柱，反應(yīng)8—48h，過濾，得到過濾溶液；將固定化酵母細(xì)胞裝入柱中，以10%—40%（w/w）的過濾溶液在ph4.5-7.5，溫度20—35℃下通過此柱，調(diào)節(jié)溶液的流量0.1-3m³/h下通過此柱，反應(yīng)8—48h，，可控制FOS成分達(dá)到60—90%的要求。

2.根據(jù)權(quán)利要求１所述的生產(chǎn)低聚果糖的方法，其特征在于：固定化果糖基轉(zhuǎn)移酶培養(yǎng)，所述的合適的培養(yǎng)基培養(yǎng)包括以下步驟：

A．斜面培養(yǎng)基

土豆200?g/L、瓊脂15?g/L、蔗糖20?g/L，30℃下培養(yǎng)5天；

B．種子培養(yǎng)基

?蔗糖?5%—20%、豆粕粉?1%—10%、玉米漿?0.1%—5%、玉米粉0.1%—5%、?硫酸鎂0.01%?—1%，磷酸氫二鉀0.01%?—1%、消泡劑0.03%，30℃發(fā)酵16h；

C．發(fā)酵培養(yǎng)基

蔗糖?5%—25%、豆粕粉?1%—10%、玉米漿?0.1%—5%、玉米粉0.1%—5%、硫酸鎂0.01%?—1%，磷酸氫二鉀0.01%?—1%、消泡劑0.03%，30℃發(fā)酵24h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)低聚果糖的方法，其特征在于：固定化酵母細(xì)胞培養(yǎng)，所述的合適的培養(yǎng)基培養(yǎng)包括以下步驟：

A．斜面培養(yǎng)基

麥芽汁12?g/L、瓊脂15?g/L，30℃下培養(yǎng)2天；

B．種子培養(yǎng)基

?葡萄糖?1%—20%、蛋白胨?0.1%—10%、玉米漿?0.1%—5%、?硫酸鎂??0.01%?—1%，磷酸氫二鈉0.01%?—1%、消泡劑0.02%，30℃發(fā)酵16-20h；

C．發(fā)酵培養(yǎng)基

?葡萄糖1%—20%、蛋白胨0.1%—10%、玉米漿0.1%—5%、硫酸鎂0.01%?—1%，磷酸氫二鈉0.01%—1%、消泡劑0.02%，30℃發(fā)酵30-35h。