[發(fā)明專利]一種從細(xì)葉杜香中提取鑒定七葉樹(shù)素、秦皮苷、秦皮素和白藜蘆醇的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310511195.1
• 申請(qǐng)日: 2013-10-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103558324A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 裴世春;徐玖亮;高建偉;甄玉萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 齊齊哈爾大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;丁金玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)葉杜香中抗氧化活性成分的提取鑒定方法，特別涉及一種從細(xì)葉杜香中提取鑒定七葉樹(shù)素、秦皮苷、秦皮素和白藜蘆醇的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

杜香（Ledum?palustre?L）是分布我國(guó)大小興安嶺、長(zhǎng)白山地區(qū)的主要天然植物之一，是杜鵑花科杜香屬小灌木，分為細(xì)葉杜香（Ledum?palustre?L.var.Angustum?E.Busch）和寬葉杜香（Ledum?palustre?L.var.dilatatum?Wahl），資源十分豐富。杜香廣泛應(yīng)用于中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)，其功能包括：解毒、戒毒、抗菌、抗癌和抗糖尿病等，常用于治療風(fēng)濕病、關(guān)節(jié)病、咳嗽、感冒等疾病。現(xiàn)代研究表明，杜香屬植物含有豐富的揮發(fā)油、萜烯類、黃酮類等多種生物活性化合物，廣東藥學(xué)院的黃瑩、張德志等分離鑒定了七葉內(nèi)酯、對(duì)羥基苯甲酸、槲皮素、金絲桃苷等化學(xué)成分，中國(guó)沈陽(yáng)藥科大學(xué)的左文健、王金輝等從杜香中鑒定出蒲公英萜醇、熊果酸、熊果醇、角鯊烯、大戟醇乙酰酯、槲皮素、山奈酚、棉花皮素、正十一烷、正庚烷等多種化學(xué)成分，東北林業(yè)大學(xué)的趙敏等從杜香中鑒定出32種揮發(fā)性成分，相對(duì)于眾多的杜香中的各種化學(xué)成分分析研究，對(duì)杜香的抗氧化活性成分的分離鑒定以及應(yīng)用方面還處于初期探索階段，僅有中國(guó)齊齊哈爾大學(xué)的鄭永杰、裴世春等少數(shù)研究人員發(fā)表論文分析鑒定了杜香中的抗氧化活性成分，并利用核磁及質(zhì)譜等技術(shù)確證了杜香中含有秦皮素、染料木苷等抗氧化活性成分，其研究雖然在抗氧化活性成分的分離鑒定過(guò)程中采用了On-line?HPLC-ABTS+在線系統(tǒng)，但是抗氧化成分的提取方法采用的是傳統(tǒng)的溶劑萃取法，不僅提取過(guò)程復(fù)雜繁瑣，且有效成分提取效率不高，無(wú)法鑒定出更多的抗氧化活性成分。

目前，抗氧化活性成分的提取鑒定方法主要分三個(gè)步驟，一是抗氧化活性成分的提取分離，二是抗氧化活性成分的活性分析，三是抗氧化活性成分的結(jié)構(gòu)鑒定。抗氧化活性成分的提取分離通常包括各種溶劑萃取法、超臨界流體萃取法以及結(jié)合微波、色譜柱等各種輔助工具進(jìn)行的提取、分離、純化方法。抗氧化活性成分的活性鑒定主要是采用體外或體內(nèi)抗氧化活性的測(cè)定的方法。成分的結(jié)構(gòu)鑒定主要是采用核磁、各種色譜技術(shù)進(jìn)行。

傳統(tǒng)的抗氧化活性成分的提取鑒定不僅分析時(shí)間長(zhǎng)，而且操作過(guò)程繁瑣，特別是不利于微量抗氧化成分的提取鑒定。

現(xiàn)代技術(shù)中，有兩項(xiàng)技術(shù)有利于抗氧化成分的快速提取鑒定，一是高壓溶液提取法（PLE，Pressure?Liquid?Extract)，PLE是一種非常先進(jìn)的提取方法。原理是提取溶液在高溫高壓下對(duì)樣品進(jìn)行提取，高溫幫助液體更好的進(jìn)入提取物里，減小提取溶液的粘性，提高擴(kuò)散率，高壓則能夠幫助當(dāng)液體超過(guò)沸點(diǎn)時(shí)保持液體狀態(tài)。PLE與傳統(tǒng)提取方法比較有著顯著的優(yōu)點(diǎn)，包括：減少提取時(shí)間、減少提取溶液的使用量、減少對(duì)環(huán)境污染、并且提高提取率，目前在化合物提取過(guò)程中已有應(yīng)用，包括發(fā)明專利號(hào)為CN201310055337.8的一種利用高壓溶劑提取橘皮中有效成分的方法及裝置等；二是On-line?HPLC-DPPH⁺在線鑒定抗氧化組分的方法，該方法具有簡(jiǎn)便快速的特點(diǎn)，專利號(hào)為CN102879499A和CN102879500A的專利公開(kāi)了一種DPPH-HPLC法檢測(cè)白刺果汁中抗氧化成分的方法和一種DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，該方法主要是利用了DPPH作為檢測(cè)試劑。

杜香中含有豐富的抗氧化活性成分，在活性成分的提取過(guò)成中需要對(duì)其提取過(guò)程進(jìn)行有效控制，特別是需要一種多種成分同時(shí)進(jìn)行提取鑒定的簡(jiǎn)便有效的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提供一種從細(xì)葉杜香里同時(shí)提取鑒定抗氧化活性成分七葉樹(shù)素、秦皮苷、秦皮素和白藜蘆醇的方法。

本發(fā)明目的通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)，包括如下步驟：

（1）原料選取和預(yù)處理：取大興安嶺細(xì)葉杜香的嫩枝為原料，經(jīng)過(guò)室溫陰干后制成長(zhǎng)度為0.5-1.0cm的前處理樣品。

（2）加壓溶液提取技術(shù)提取粗提物：取預(yù)處理樣品1-2克與雙倍重量的海沙混合填裝于加速溶劑萃取管（ASE）中后放入密閉避光的提取箱中，在提取溫度115℃，提取壓力1500psi的條件下，用加速溶劑萃取管容積的60%-70%的體積分?jǐn)?shù)為65%的甲醇靜止提取20-30min后收集溶劑，用加速溶劑萃取管容積的30%-40%的體積分?jǐn)?shù)為65%的甲醇溶液對(duì)加速溶劑萃取管進(jìn)行沖洗，用氮?dú)鈱⑻崛∪芤喝繘_出后收集所有提取溶液，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45-50℃下將提取液制成浸膏粗提物。