[發明專利]一種制備磷脂酰絲氨酸的方法有效

申請號：	201310508296.3	申請日：	2013-10-24
公開（公告）號：	CN103555783A	公開（公告）日：	2014-02-05
發明（設計）人：	李艷;趙江;張永利;寇玉鋒	申請（專利權）人：	陜西源邦生物技術有限公司
主分類號：	C12P13/06	分類號：	C12P13/06
代理公司：	西安智邦專利商標代理有限公司 61211	代理人：	胡樂
地址：	710065***	國省代碼：	陜西;61
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種制備磷脂絲氨酸方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種制備穩定的粉末磷脂酰絲氨酸的方法。

背景技術

磷脂是磷酸甘油脂的簡稱，對生物膜的生物活性和機體的正常代謝有重要的調節功能。通常所說的磷脂是指含有磷元素的脂肪物質,它是多種磷脂的混合物,成分主要為磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰絲氨酸(PS)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)等。

磷脂酰絲氨酸是一種唯一能夠調控細胞膜關鍵蛋白功能的磷脂，對許多細胞代謝過程有重要的調節作用，其主要功能是可提高腦細胞活力，對治療腦萎縮、預防老年癡呆癥，改善老年人的大腦功能有很好的療效；同時修復大腦損傷、治療兒童多動癥具有非常顯著的作用；另外可以促進腦疲勞的恢復、平衡情緒、緩解抑郁也有一定的療效。

磷脂酰絲氨酸的制備方法主要有提取法和酶轉化法。其中提取法主要是從植物細胞、動物的卵磷脂中提取PS，植物中的PS含量較少，所以提取法以動物的卵磷脂中提取為主，從動物中提取主要是動物的大腦及內臟，目前國外大部分以牛、羊、兔、馬、驢等家禽的動物腦為原料來提取PS。近年來，由于瘋牛病的等動物疾病的原因，利用動物細胞提取PS的方法，其提取的產品的安全性收到人們的懷疑，現在已處于淘汰邊緣。

酶轉化法主要是以天然的卵磷脂為基質，加入絲氨酸，在磷脂酶D的作用下，生成磷脂酰絲氨酸?？茖W文獻和專利報道了將磷脂酰膽堿通過磷脂酶D催化為磷脂酰絲氨酸的方法，這些方法大部分是通過水/有機溶劑的兩相體系，但兩相體系有機溶劑使用量大，難以除去，同時增加了反應成本。有研究者開始研究單一水相反應，專利EP1310563描述了在不使用洗滌劑和/或鈣鹽的水相中制備PS的方法，該方法需要在水中將包括磷脂，羥基接受體和磷脂酶的起始混合物勻漿。專利JP2002051794和DE102004002053公布的在純水體系中制備PS的方法也要借助特殊的均質化設備。專利CN101230365采用單一水相，但水相用量大，最大用到了反應基質的10倍，其L-絲氨酸的用量為反應基質的4-6倍量，同時在反應結束后用到了有機溶劑萃取，引入了有機溶劑的同時也增加了反應成本。專利CN102676600描述了在均相介質γ-戊內酯、2-甲基四氫呋喃或其混合物中進行反應，增加了生產成本。而在專利CN101230365中反應時間長，反應溫度高，造成反應產物中PA含量高，PS轉化率低，反應產物品質差。

發明內容

本發明的目的是提供一種新的制備磷脂酰絲氨酸的方法，以解決現有技術存在的副產物磷脂酸較多，轉化率不理想，生產成本高的問題。

本發明采用如下解決方案：

一種制備磷脂酰絲氨酸的方法，主要包括以下步驟：

（1）將磷脂酰膽堿或含有磷脂酰膽堿的天然磷脂與吐溫-80、L-絲氨酸、氯化鈣、緩沖溶液、磷脂酶D混合，在35-45℃攪拌反應8-10h；

其中，吐溫-80為天然磷脂質量的0.1-0.5%，L-絲氨酸為天然磷脂質量的2-3倍，緩沖溶液的PH值為5.1-5.5，緩沖溶液的加入量為天然磷脂質量的5-6倍，磷脂酶D的加入量為每g天然磷脂20-50U，氯化鈣與緩沖溶液的比例為1.5-1.8g/100mL；

（2）反應結束后反應粗品析出并上浮，離心分離水相和反應粗品，將分離得到的反應粗品用水洗滌，并離心過濾；

（3）離心過濾后的反應粗品加入無水乙醇浸泡，攪拌，再離心過濾；

（4）對離心過濾后產物真空干燥，即得磷脂酰絲氨酸產品。

基于上述基本方案，本發明還作如下優化限定和改進：

上述緩沖溶液的配置選用醋酸-醋酸鈉體系或磷酸氫二鈉-磷酸體系。

上述步驟（3）中無水乙醇加入量為此時反應粗品質量的2-4倍，無水乙醇浸泡2-4h后攪拌1-2h，再離心過濾。