[發明專利]西葫蘆ZYMV顯性抗病基因ZYMV?1的連鎖分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201310507339.6
• 申請日: 2013-10-25
• 公開（公告）號: CN104560961B
• 公開（公告）日: 2018-03-30
• 發明（設計）人: 李海真
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/6895
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及西葫蘆ZYMV顯性抗病基因ZYMV-1的連鎖分子標記及其應用。

背景技術

西葫蘆是全球范圍內普遍栽植的重要蔬菜之一，在我國的栽培面積逐年增加，特別是近年來保護地設施栽培發展迅速，已成為保護地中繼黃瓜之后的第二大栽培作物。對農民增收、農業結構調整以及豐富人民的菜籃子有著重要意義。

小西葫蘆黃化花葉病毒病(zucchini yellow mosaic virus，ZYMV)是目前危害西葫蘆等葫蘆科作物生產的主要病害之一。ZYMV在世界范圍內傳播蔓延迅速，近年來在我國西葫蘆生產中的危害日趨嚴重和廣泛(劉衛榮等，2008)。植株感染ZYMV后會產生花葉、植株矮化畸形，果實表面瘤狀凸凹不平、果肉僵硬且味苦澀等癥狀，使果實失去商品價值，導致產量損失達60％以上，嚴重者甚至絕產(Zechmann et a1.，2003；劉衛榮等，2008)。

目前還沒有防治該病毒病的有效試劑，培育和推廣抗病品種是防治ZYMV最經濟、安全、有效的措施。但目前，抗病基因主要來源于野生南瓜材料，存在抗性性狀轉育困難，不利性狀連鎖累贅，傳統抗病接種鑒定方法受環境和人為操作因素影響大，鑒定結果準確性和穩定性不高，導致抗病育種效率低、周期長、抗病品種少，遠遠不能滿足生產需要。緊密連鎖的分子標記可以加速抗病育種進程及提高選擇的準確性，是分子標記輔助選擇育種的必要條件。但目前還沒有與西葫蘆ZYMV抗病基因緊密連鎖分子標記的研究報道。因此，開發與西葫蘆ZYMV抗病基因緊密連鎖的分子標記，對于提高西葫蘆抗病育種效率，拓展抗病基因應用范圍，保障西葫蘆的健康生產具有重要的實際應用價值。

發明內容

本發明的目的是提供一種西葫蘆ZYMV顯性抗病基因ZYMV-1的連鎖分子標記及其應用，可快速準確地檢測抗性性狀轉育后代植株是否具有ZYMV-1抗病基因，為ZYMV抗病品種的選育提供了保障，彌補了現有技術中的不足之處。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現：

西葫蘆ZYMV顯性抗病基因ZYMV-1的連鎖分子標記，所述分子標記為ZY-138和ZY-157；

所述的分子標記ZY-138：

左端引物序列為SEQ ID NO.1，

右端引物序列為SEQ ID NO.2，

擴增產物為150bp，此分子標記來自西葫蘆自交系BS12染色體，為共顯性分子標記，利用Mapmaker/EXP3.0測得與抗病基因ZYMV-1的遺傳距離為0.4cM；

所述的分子標記ZY-157：

左端引物序列為SEQ ID NO.3，

右端引物序列為SEQ ID NO.4，

擴增產物為97bp，此分子標記來自西葫蘆自交系BS12染色體，為共顯性分子標記，利用Mapmaker/EXP3.0測得與抗病基因ZYMV-1的遺傳距離為2.6cM。

獲得西葫蘆抗ZYMV病毒病基因ZYMV-1的分子標記的方法，包括：以西葫蘆自交系BS3和BS12分別作為感病和抗病親本配制F2代分離群體，用584對SSR引物篩選與西葫蘆ZYMV顯性抗病基因ZYMV-1連鎖的分子標記，得到2個分布在抗病基因兩側的共顯性分子標記ZY-138和ZY-157。

西葫蘆ZYMV抗病基因ZYMV-1的分子標記方法，用以下的任意一對分子標記引物PCR擴增待檢測西葫蘆基因組DNA，并檢測擴增產物：

1)權利要求1所述的分子標記ZY-138：

左端引物序列為SEQ ID NO.1，

右端引物序列為SEQ ID NO.2，

2)權利要求1所述的分子標記ZY-157：

左端引物序列為SEQ ID NO.3，

右端引物序列為SEQ ID NO.4，

如果用引物SEQ ID NO1和SEQ ID NO.2，ZY-138能夠擴增出150bp的擴增片段，或者用引物SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，ZY-157能夠擴增出97bp的擴增片段，則標志著待檢西葫蘆存在抗ZYMV的基因ZYMV-1。

所述的分子標記可以應用在西葫蘆種質資源中ZYMV抗病基因的鑒定和轉育中。

本發明的有益效果為：

1、在西葫蘆自交系BS12中鑒定了一個ZYMV抗病基因ZYMV-1。