[發明專利]用于微陣列的反應緩沖液

在審

• 申請號: 201310507116.X
• 申請日: 2006-12-29
• 公開（公告）號: CN103627794A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 許亮;孫震宏
• 申請（專利權）人: 霍尼韋爾國際公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 趙蘇林;權陸軍

1.用于檢測或定量核酸的方法，該方法包括：

在緩沖液中擴增核酸，其中所述緩沖液包括：50-200mM的鹽；10-30mM的Tris-HCl；2-10mM的水溶性鎂鹽；0.05-1.5％的表面活性劑；50-300nM的一種或多種引物；20-150μM的一種或多種dNTPs；5-15％的甘油；0.5-1.5％的甲酰胺；和至少5個單位/ml的聚合酶；

所述擴增包括：

通過將緩沖液中的核酸的溫度升高到94-98℃的第一溫度來使緩沖液中的核酸變性；

通過將第一溫度降低到第二溫度來使緩沖液中的核酸退火，第二溫度比多個引物的解鏈溫度低5℃；

通過將第二溫度升高到72℃的第三溫度來使退火后的核酸延伸；

在緩沖液中雜交核酸；

和形成微陣列。

2.權利要求1的方法，其中所述緩沖液進一步包括0.05-0.15mg/ml的穩定化蛋白。

3.權利要求1的方法，其中所述鹽包括氯化鉀(KCl)。

4.權利要求1的方法，其中所述水溶性鎂鹽包括氯化鎂(MgCl₂)。

5.權利要求2的方法，其中所述穩定化蛋白包括牛血清白蛋白(BSA)。

6.權利要求1的方法，其中所述一種或多種dNTPs包括胸苷三磷酸(dTTP)，脫氧腺苷(dATP)，脫氧胞苷三磷酸(dCTP)，脫氧鳥苷三磷酸(dGTP)，或它們的組合。

7.權利要求1的方法，其中所述聚合酶包括Taq聚合酶。

8.權利要求1的方法，其中表面活性劑包括Triton?X100。

9.用于檢測或定量核酸的方法，該方法包括：

在緩沖液中擴增核酸；

在緩沖液中雜交核酸；

和形成微陣列；

其中所述緩沖液包括：約50-200mM的鹽；約10-30mM的Tris-HCl；約2-10mM的水溶性鎂鹽；約0.05-1.5％的Triton?X100；約50-300nM的一種或多種引物，所述引物長度為15到40個核苷酸，解鏈溫度為約55℃到約65℃；約20-150μM的一種或多種脫氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)；約5-15％的甘油；約0.5-1.5％的甲酰胺；和至少5個單位/ml的聚合酶。

10.權利要求9的方法，包括通過將緩沖液中的核酸的溫度升高到94-98℃的第一溫度來使緩沖液中的核酸變性。

11.權利要求9的方法，包括通過將核酸的第一溫度降低到第二溫度來使緩沖液中的核酸退火，第二溫度比所述一種或多種引物的解鏈溫度低5℃。

12.權利要求11的方法，包括通過將溫度升高到72℃來使退火后的核酸延伸。

13.權利要求9的方法，其中所述緩沖液進一步包括0.05-0.15mg/ml的穩定化蛋白。

14.權利要求13的方法，其中所述穩定化蛋白包括牛血清白蛋白(BSA)。

15.權利要求9的方法，其中所述鹽包括氯化鉀(KCl)。

16.權利要求9的方法，其中所述水溶性鎂鹽包括氯化鎂(MgCl₂)。

17.權利要求9的方法，其中所述一種或多種dNTPs包括胸苷三磷酸(dTTP)，脫氧腺苷(dATP)，脫氧胞苷三磷酸(dCTP)，脫氧鳥苷三磷酸(dGTP)，或它們的組合。

18.權利要求9的方法，其中所述聚合酶包括Taq聚合酶。