[發明專利]腹足類軟體動物的固定方法

有效

• 申請號: 201310507008.2
• 申請日: 2013-10-24
• 公開（公告）號: CN103535303A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 丁少雄;黃建榮;李海;柯才煥
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種腹足類軟體動物，尤其是涉及一種腹足類軟體動物的固定方法。

背景技術

以螺類為代表的軟體動物是重要的潮間帶生物，它們在生態系統功能、形態結構、活性物質和遺傳進化等方面具有重要的科學意義。在對螺類進行科學研究時，不可避免地需要對螺進行樣品采集及固定操作，最常用的固定液是酒精和甲醛。螺的外部形態由螺殼和厴組成，在固定過程中，螺的軟體部分一旦受到刺激，將緊緊地縮進螺殼并在殼口堵上厴。普通的固定液無法滲透螺殼和角質的厴進入軟體部。經常是螺類在固定液中浸泡時間很長，內部軟體組織部分腐敗了其厴才微微張開，采用此種方法固定的樣品幾乎無法開展形態學和分子生物學分析。對于個體大的種類，普通的固定方法更加無效。如果在采樣過程中對每個螺進行撬開厴，灌入固定液的操作，這無疑增加了野外采樣的難度，也常常會損害螺類機體的完整性。對于一些個體小數量的樣品，這樣的操作基本不可能。

發明內容

本發明的目的在于針對腹足類、瓣鰓類等軟體動物的野外采集和固定困難等問題，提供采用先冷凍再固定的方法進行螺類生物的保存，具有簡單快捷，固定效果好等優點的一種腹足類軟體動物的固定方法。

本發明包括以下步驟：

1）獲取腹足類、瓣鰓類等軟體動物的生物樣品，去除表面雜物、粘液；

2）將腹足類、瓣鰓類等軟體動物放入底部裝有冰塊的保溫箱中，在冰塊與生物樣品之間墊一層導熱性能差的材料，避免生物體直接接觸冰塊，保溫箱保存干燥；

3）經過1～2h的低溫保存后，腹足類、瓣鰓類等軟體動物基本失去收縮能力，對外界的反應遲鈍，厴外露或者殼微張；

4）在需要固定的腹足類、瓣鰓類等軟體動物的厴部或者雙殼之間插入異物，防止動物在受刺激時再次將厴或者殼閉上；

5）加入固定劑，完成殺死動物，初步固定的過程；

6）根據實驗需要，定期更換固定劑，實現標本的長期完整保存。

在步驟4）中，所述異物可采用牙簽等。

在步驟5）中，所述固定劑可選自酒精或甲醛等。

本發明的優點如下：

1、特別適宜現場操作，無需額外的電力或者麻醉劑。

2、對于鮮活的個體固定徹底，組織結構保存完整。

3、樣品一直處于低位或固定劑當中，有效避免動物組織腐敗。

具體實施方式

實施例1

在浙江南麂島采集荔枝螺，樣品采集清理后置于帶冰的保溫箱中。樣品采集過程約2h。回到駐地后，所有的螺類都微微張開了厴部。在厴部與外殼之間插入牙簽，螺并沒有反應。加入酒精等固定劑后，螺略有收縮，但是被牙簽阻隔，還留有大的孔隙供固定劑進入軟體部分。固定后的樣品很容易將軟體部分旋出。螺類的齒舌制備完整，基因組DNA，線粒體DNA的抽提效果良好，能夠滿足PCR等實驗的需求。

實施例2

在廈門市場購買波紋巴非蛤，采用與實施例1相似的方法，波紋巴非蛤的固定效果良好，完全能夠滿足現代實驗的要求。