[發明專利]一種基于單克隆抗體的檢測食品中鼠傷寒沙門氏菌的雙抗體夾心法

有效

• 申請號: 201310506513.5
• 申請日: 2013-10-24
• 公開（公告）號: CN103558388A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 胥傳來;王文彬;匡華;徐麗廣;馬偉;劉麗強
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種基于單克隆抗體的檢測食品中鼠傷寒沙門氏菌的雙抗體夾心法，其特征在于步驟為：

（1）鼠傷寒沙門氏菌LPS單克隆抗體的制備

?????以混合后的鼠傷寒沙門氏菌ATCC?13311菌體和光滑型的鼠傷寒沙門氏菌LPS為免疫原，免疫?7周齡的BALB/c小鼠，經免疫、融合、篩選，得10株LPS單克隆抗體；

（2）單克隆抗體的配對篩選

將純化后的10株LPS單克隆抗體分別標記辣根過氧化物酶HRP，直接法鑒定標記成功后進行夾心法配對；配對參數如下：包被抗體5μg/mL；包被液為pH9.6、0.01M的碳酸鹽緩沖液；標品濃度10^7cfu/mL；標品稀釋液pH7.2、0.01M的PBS；酶標抗體稀釋1000倍使用；在此條件下，實驗成功得到了40對P/N值>5的配對；

（3）夾心法的建立

選擇檢測限穩定、靈敏的配對，以6E2抗體即CGMCC?No.7206分別為包被抗體和酶標抗體建立夾心法；具體參數如下：

抗體包被濃度：5μg/mL，

包被液：pH9.6、0.01M的碳酸鹽緩沖液，

標品稀釋液：pH7.2、0.01M的PBS+0.1%Tween，

檢測抗體濃度：1.6μg/mL，

反應時間：包被、封閉：37℃、2h；標準品：37℃、1h；檢測抗體：37℃、1h；顯色10min；

優化后鼠傷寒沙門氏菌夾心法LOD：500cfu/mL。