[發明專利]一種增強型化學發光試劑

有效

• 申請號: 201310506254.6
• 申請日: 2013-10-24
• 公開（公告）號: CN103499572A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 侯志波
• 申請（專利權）人: 侯志波
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 深圳市合道英聯專利事務所(普通合伙) 44309
• 代理人: 朱思全;陳宜芳

技術領域

本發明涉及免疫檢測技術領域，具體涉及一種用于化學發光免疫檢測的增強型化學發光試劑。

背景技術

化學發光免疫分析是（CLIA）是將化學發光體系與免疫反應相結合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術。是繼放免分析、酶免分析、熒光免疫分析和時間分辨熒光免疫分析之后發展起來的一項最新免疫測定技術。化學發光免疫分析具有靈敏度高、簡便快速、線性穩定、安全無害等特點。

魯米諾（Luminol)、異魯米諾（Isoluminol）及其衍生物是最早在化學發光法中使用的化學發光物質。魯米諾化學名3-氨基鄰苯二甲酰胼，最早由Albrecht報道其發光特性。這類物質通過氧化產生α-羥基過氧化物的中間體，該中間體的分解可釋放出光能，所發光的性質與反應系統的pH值有關。魯米諾類化合物的氧化步驟與溶劑組分有關，在非質子溶劑中，化學發光只需要氧氣和一種強堿；在質子溶劑中，需要酶來催化各種氧的衍生物氧化魯米諾。魯米諾體系的發光效率并不高，標記后發光強度會隨時間降低，而通過對非雜環進行化學修飾可以提高部分發光強度。

化學發光酶免疫分析技術常用的兩種標記體系是辣根過氧化物酶（HRP)和堿性磷酸酶（AP)。AP酶發光體系的底物價格昂貴，限制了它的應用，而HRP酶體系具有高轉換系數、對不同靈敏度分析系統具有通用性而受到廣泛應用。HRP酶體系最常用的發光底物是魯米諾、?異魯米諾及其衍生物。不過，如果不使用增強劑，魯米諾體系的發光為閃光型、強度弱、持續時間短。

上世紀八十年代中后期，科研人員逐漸發現了可以大大增強酶催化魯米諾化學發光體系發光強度的物質，即增強劑，其可以明顯增強發光強度，延長發光時間，提高信噪比及靈敏度。與不含增強劑的體系相比，加入增強劑后組成的魯米諾體系的發光強度可提高1000倍，發光時間延長至幾個小時，使原來的瞬時發光變為了持續發光，這些重大改進使得該體系在基因、免疫分析領域得到廣泛應用。

目前市場上的發光底物穩定性不夠、靈敏度有待改善、和/或使用成本較高，限制了化學發光免疫檢測的應用。因此為適應科學研究及市場的實際需求，有必要開發新的配方，以提供研究者與使用者更多的選擇。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足及實際需求，提供一種新的性質穩定、成本低的增強型化學發光試劑，用于增強現有魯米諾-過氧化物化學發光體系的發光強度，延長該化學發光體系的發光持續時間，為化學發光酶免疫檢測技術的發光體系提供一種新的選擇。

為實現上述目的，本發明提供以下技術方案：

一種增強型化學發光試劑，由溶液A和溶液B組成，其特征在于，

所述溶液A包括：

魯米諾或魯米諾衍生物，8～15?mmol/L

氫氧化鈉，1～5?mmol/L

4-[1H-1,2,4-三氮唑-1-基甲基]苯胺鹽酸鹽???0.1～1.5?mmol/L

1-萘硼酸，0.1～0.8?mmol/L

0.1mol/L?Tris-HCl?緩沖液，pH?7.5～10；

所述溶液B包括：

雙氧水，5～10mmol/L

谷氨酸，體積分數0.01%～0.05%

0.1mol/L?Tris-HCl?緩沖液，pH?7.5～10。

在一種優選實施方案中，所述增強型化學發光試劑，由溶液A和溶液B組成，其特征在于，

所述溶液A包括：

魯米諾或魯米諾衍生物，10?mmol/L

氫氧化鈉，3?mmol/L

4-[1H-1,2,4-三氮唑-1-基甲基]苯胺鹽酸鹽，1.0?mmol/L

1-萘硼酸，0.5?mmol/L

0.1mol/L?Tris-HCl?緩沖液，pH?8.5；

所述溶液B包括：

雙氧水：濃度為5mmol/L

谷氨酸，體積分數0.03%

0.1mol/L?Tris-HCl?緩沖液?pH?8.5。

所述魯米諾衍生物可以是魯米諾鈉鹽、異魯米諾或4-氨基已基-N-乙基異魯諾等。使用時，將溶液A和溶液B以等體積混合，構成增強型化學發光試劑。?