[發(fā)明專利]一種中藥龍膽中苯甲酸酯類化合物的測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310503770.3
• 申請日: 2013-10-24
• 公開（公告）號: CN103743828A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發(fā)明（設計）人: 潘俊;肖丹;李晚誼;沈銳
• 申請（專利權）人: 云南省農(nóng)業(yè)科學院藥用植物研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明屬于化學分析領域，具體涉及一種中藥龍膽中抗老年癡呆有效成分苯甲酸酯類化合物的測定方法。?

背景技術

中藥龍膽（Gentianae?Radix?et?Rhizoma）為龍膽科植物：條葉龍膽Gentiana?manshurica?Kitag.，龍膽Gentiana?scabra?Bge.，三花龍膽Gentiana?triflora?Pall.?或滇龍膽Gentiana?rigescens?Franch.?的干燥根和根莖。滇龍膽，別名：滇龍膽草（滇南本草）、堅龍膽（中國高等植物圖鑒）、苦草、青魚膽、小秦艽（云南）、藍花根、炮仗花，是《中國藥典》收錄的龍膽品種之一，也是云南著名道地藥材，并收載于《滇南本草》。龍膽在《神農(nóng)本草經(jīng)》中作為上品收載，苦、寒；歸肝、膽經(jīng)；具有清熱燥濕,?瀉肝膽火的功效；?用于治療濕熱黃疸,?陰腫陰癢,?帶下,?強中,?濕疹瘙癢,?目赤,?耳聾,?脅痛,?口苦，驚風抽搐等癥。龍膽中主要成分為環(huán)烯醚萜苷類化合物,?以龍膽苦苷、獐牙菜苦苷等為代表。該類物質具有保肝、健胃、鎮(zhèn)痛、抗病毒、促進細胞分裂、加快傷口愈合等多種功效。?

從滇龍膽提取物中發(fā)現(xiàn)了十余種具有顯著類似神經(jīng)生長因子活性的2,3-二羥基苯甲酸酯類新化合物，命名為gentisides。具有顯著的類似神經(jīng)生長因子活性，神經(jīng)營養(yǎng)作用和保護作用，是一種高效低毒的抗老年癡呆癥中藥活性組分。關于2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物只有化學合成的脂肪鏈含碳數(shù)低于11或16個碳的文獻報道；歐洲專利（EP?1?930?002?A1）描述了苯甲酸酯類化合物式在治療和預防病毒感染方面的應用；中國專利（CN?1411339A）和美國專利所描述的苯甲酸類化合物主要用于抑菌，作為食品添加劑等。此外，龍膽具有來源廣泛，取材便利等優(yōu)點，容易獲得大量的2,3-二羥基苯甲酸酯類化合物。對研發(fā)預防和治療老年癡呆癥等神經(jīng)退行性疾病的新藥具有重要意義。?

目前文獻多集中在龍膽中龍膽苦苷、獐牙菜苦苷等的高效液相色譜（HPLC）測定上，而對龍膽中的2,3-二羥基苯甲酸酯類活性成分未見報道。液相色譜-串聯(lián)質譜（LC-MS/MS）聯(lián)用技術具有靈敏度高、專屬性好、快速、高效的特點，已逐漸成為中藥微量成分定量分析的有效手段。因此，本專利采用LC-MS/MS負離子多反應監(jiān)測（MRM）掃描模式，同時測定滇龍膽中4種苯甲酸酯類化合物的含量，為其開發(fā)利用和質量控制提供必要的保證和依據(jù)。?

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是針對目前仍未有檢測中藥龍膽中的主要抗老年癡呆的活性成分的方法，而提供一種液相色譜-串聯(lián)質譜法檢測龍膽中苯甲酸酯類化合物的方法。?

本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)。?

本發(fā)明的檢測方法采用95%乙醇溶液超聲萃取龍膽中的苯甲酸酯類化合物，并通過微孔濾膜過濾處理，采用液相色譜-串聯(lián)質譜聯(lián)用儀（LC-MS/MS）實現(xiàn)龍膽中主要苯甲酸酯類化合物的測定，具體步驟如下。?

a、龍膽中主要苯甲酸酯類活性成分的提取：?

將龍膽干燥樣品粉碎過篩，置于錐形瓶中并加入95%乙醇溶液，經(jīng)超聲萃取、過濾后，濾液經(jīng)0.22m微孔濾膜處理，制備樣品溶液。

b、樣品的分析：?

取不同部位的龍膽樣品，按步驟a所述的方法制備供試品溶液，采用LC-MS/MS測定，記錄峰面積，分別計算樣品中gentiside?A，?gentiside?J，?gentiside?B，gentiside?K的含量，結果見表1。

本發(fā)明中步驟a中所述的篩孔徑為100目；步驟a中所述的龍膽樣品為1.5g；步驟a中所述的95%乙醇溶液為10mL；步驟a中所述的超聲萃取時間為40min；步驟a中所述的微孔濾膜孔徑為0.22μm。?

本發(fā)明中所用中藥龍膽樣品采集自云南，不同部位龍膽樣品(根、莖、葉、種子)分別檢測。?

本發(fā)明的有益效果如下：?

本發(fā)明中采用的LC-MS/MS法，靈敏度高，穩(wěn)定性好，方便快速。因此本發(fā)明方法能有效提高分析效率，非常適合復雜基質中超低含量目標物的批量分析。

附圖說明

圖1?對照品gentiside?A、gentiside?J、gentiside?B、gentiside?K二級離子掃描質譜圖。?

圖2?對照品和樣品的總離子流色譜圖。?

具體實施方式

本發(fā)明將結合以下實施例作進一步說明。?